പ്രശ്ന വിശകലന ഗൈഡ്

നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണങ്ങൾക്ക് സഹായകരമാകുമെന്ന പ്രതീക്ഷയിൽ, വൈറൽ ഡിഎൻഎ/ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിൽ നേരിട്ടേക്കാവുന്ന പ്രശ്നങ്ങളുടെ വിശകലനമാണ് ഇനിപ്പറയുന്നത്.കൂടാതെ, ഓപ്പറേഷൻ നിർദ്ദേശങ്ങളും പ്രശ്ന വിശകലനവും ഒഴികെയുള്ള മറ്റ് പരീക്ഷണാത്മകമോ സാങ്കേതികമോ ആയ പ്രശ്നങ്ങൾക്ക്, നിങ്ങളെ സഹായിക്കാൻ ഞങ്ങൾ പ്രത്യേക സാങ്കേതിക പിന്തുണ നൽകിയിട്ടുണ്ട്.നിങ്ങൾക്ക് എന്തെങ്കിലും ആവശ്യമുണ്ടെങ്കിൽ, ഞങ്ങളെ ബന്ധപ്പെടുക: 028-83360257 അല്ലെങ്കിൽ ഇ-മെയിൽ:

Tech@foregene.com.

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്സ്ട്രാക്ഷൻ അല്ലെങ്കിൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വിളവ് കുറവാണ്

വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമതയെ ബാധിക്കുന്ന നിരവധി ഘടകങ്ങളുണ്ട്, ഉദാഹരണത്തിന്: സാമ്പിൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഉള്ളടക്കം, പ്രവർത്തന രീതി, എല്യൂഷൻ അളവ് മുതലായവ.

സാധാരണ കാരണങ്ങളുടെ വിശകലനം:

1. നടപടിക്രമത്തിനിടയിൽ ഒരു ഐസ് ബാത്ത് അല്ലെങ്കിൽ താഴ്ന്ന താപനില (4 ° C) സെന്റീഫഗേഷൻ നടത്തി.

നിർദ്ദേശം: മുഴുവൻ പ്രക്രിയയിലുടനീളം റൂം താപനിലയിൽ (15-25 ° C) പ്രവർത്തിക്കുക, ഐസ് ബാത്ത്, താഴ്ന്ന താപനില സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ എന്നിവ ചെയ്യരുത്.

2. സാമ്പിൾ തെറ്റായി സംഭരിച്ചു അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിച്ചു.

ശുപാർശ: -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സാമ്പിളുകൾ സംഭരിക്കുക, ആവർത്തിച്ചുള്ള മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും ഒഴിവാക്കുക;ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ പുതുതായി ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

3. അപര്യാപ്തമായ സാമ്പിൾ ലിസിസ്.

ശുപാർശ: സാമ്പിളും ലിസിസ് വർക്കിംഗ് ലായനിയും നന്നായി കലർത്തി 10 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ (15-25 ° C) ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

4. എല്യൂയന്റിന്റെ തെറ്റായ കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ.

നിർദ്ദേശം: RNase-Free ddH2O പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം മെംബ്രണിന്റെ മധ്യത്തിൽ ഡ്രോപ്പ്വൈസ് ആയി ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പുവരുത്തുക, കൂടാതെ അത് പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം റിംഗിൽ ഇടരുത്.

5. ബഫർ RW2-ലേക്ക് കേവല എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർത്തിട്ടില്ല.

നിർദ്ദേശം: ദയവായി നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക, ബഫർ RW2-ലേക്ക് സമ്പൂർണ്ണ എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർക്കുക, കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി ഇളക്കുക.

6. അനുചിതമായ സാമ്പിൾ വോളിയം.

നിർദ്ദേശം: ഓരോ 500µl ബഫർ DRL-നും 200µl സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സ് ചെയ്യുന്നു.അമിതമായ സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ വിളവ് കുറയ്ക്കും.

7. അനുചിതമായ എല്യൂഷൻ വോളിയം അല്ലെങ്കിൽ അപൂർണ്ണമായ എല്യൂഷൻ.

ശുപാർശ: ശുദ്ധീകരണ നിരയുടെ എല്യൂന്റ് വോളിയം 30-50μl ആണ്;എല്യൂഷൻ ഇഫക്റ്റ് തൃപ്തികരമല്ലെങ്കിൽ, 5-10മിനിറ്റ് പോലെ, പ്രീഹീറ്റ് ചെയ്ത RNase-Free ddH2O ചേർത്ത ശേഷം ഊഷ്മാവിൽ സമയം നീട്ടാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

8. ബഫർ RW2 ഉപയോഗിച്ച് കഴുകിയ ശേഷം കോളത്തിൽ എത്തനോൾ അവശേഷിക്കുന്നു.

നിർദ്ദേശം: ബഫർ RW2 ഉപയോഗിച്ച് 2 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ കഴിഞ്ഞ് എത്തനോൾ അവശേഷിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, ശേഷിക്കുന്ന എത്തനോൾ പൂർണ്ണമായും നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി കോളം 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വയ്ക്കാം.

ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വിഘടിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു

ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ ഗുണനിലവാരം സാമ്പിളിന്റെ സംരക്ഷണം, RNase മലിനീകരണം, പ്രവർത്തനം, മറ്റ് ഘടകങ്ങൾ എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.സാധാരണ കാരണങ്ങളുടെ വിശകലനം:

1. ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ യഥാസമയം സംഭരിച്ചില്ല.

നിർദ്ദേശം: ശേഖരിച്ചതിന് ശേഷം സമയബന്ധിതമായി സാമ്പിൾ ഉപയോഗിക്കുന്നില്ലെങ്കിൽ, ദയവായി അത് -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ സൂക്ഷിക്കുക.ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ, പുതുതായി ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

2. സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ച് ആവർത്തിച്ച് ഫ്രീസ് ചെയ്ത് ഉരുകുക.

നിർദ്ദേശം: സാമ്പിളുകളുടെ ശേഖരണത്തിലും സംഭരണത്തിലും മരവിപ്പിക്കുന്നതും ഉരുകുന്നതും (ഒന്നിലധികം തവണ അല്ല) ഒഴിവാക്കുക, അല്ലാത്തപക്ഷം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വിളവ് കുറയും.

3. ഓപ്പറേഷൻ റൂമിൽ RNase അവതരിപ്പിക്കുന്നു അല്ലെങ്കിൽ ഡിസ്പോസിബിൾ ഗ്ലൗസ്, മാസ്കുകൾ മുതലായവ ധരിക്കില്ല.

ശുപാർശ: ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ പരീക്ഷണങ്ങൾ ഒരു പ്രത്യേക ആർഎൻഎ ഓപ്പറേഷൻ റൂമിലാണ് മികച്ച രീതിയിൽ നടത്തുന്നത്, പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് ലബോറട്ടറി ടേബിൾ വൃത്തിയാക്കണം.

പരീക്ഷണ വേളയിൽ RNase ന്റെ ആമുഖം മൂലമുണ്ടാകുന്ന RNA ഡീഗ്രേഡേഷൻ പരമാവധി ഒഴിവാക്കുന്നതിന് ഡിസ്പോസിബിൾ ഗ്ലൗസും മാസ്കുകളും ധരിക്കുക.

4. ഉപയോഗ സമയത്ത് RNase ഉപയോഗിച്ച് റീജന്റ് മലിനമായി.

ശുപാർശ: അനുബന്ധ പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി ഒരു പുതിയ വൈറൽ DNA/RNA ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

5. ആർഎൻഎ കൃത്രിമത്വത്തിന് ഉപയോഗിക്കുന്ന സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകളും പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകളും RNase കൊണ്ട് മലിനമായിരിക്കുന്നു.

നിർദ്ദേശം: ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌ഷനുപയോഗിക്കുന്ന സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, പൈപ്പറ്റ് നുറുങ്ങുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ തുടങ്ങിയവയെല്ലാം RNase-ഫ്രീ ആണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളെ ബാധിക്കുന്നു

ഡിഎൻഎയും ആർഎൻഎയും പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം വഴി ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെടുന്നു, ഉപ്പ് അയോണിന്റെയും പ്രോട്ടീനിന്റെയും അളവ് വളരെ കൂടുതലാണെങ്കിൽ, പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ മുതലായവ പോലുള്ള താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളെ അത് ബാധിക്കും.

1. എല്യൂട്ടഡ് ഡിഎൻഎ, ആർഎൻഎ എന്നിവയ്ക്ക് ശേഷിക്കുന്ന ഉപ്പ് അയോണുകൾ ഉണ്ട്.

നിർദ്ദേശം: ബഫർ RW2-ലേക്ക് സമ്പൂർണ്ണ എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ വോളിയം ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പുവരുത്തുക, കൂടാതെ ഓപ്പറേറ്റിംഗ് നിർദ്ദേശങ്ങളിൽ വ്യക്തമാക്കിയ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വേഗതയിൽ രണ്ട് തവണ ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകുക;ഉപ്പ് അയോൺ മലിനീകരണം കുറയ്ക്കുന്നതിന് അപകേന്ദ്രീകരണം നടത്തുക.

2. എല്യൂട്ടഡ് ഡിഎൻഎയിലും ആർഎൻഎയിലും എത്തനോൾ അവശിഷ്ടങ്ങൾ ഉണ്ട്.

നിർദ്ദേശം: ബഫർ RW2 ഉപയോഗിച്ച് വാഷിംഗ് സ്ഥിരീകരിച്ച ശേഷം, ഓപ്പറേറ്റിംഗ് നിർദ്ദേശങ്ങളിൽ അപകേന്ദ്ര വേഗതയിൽ ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തുക;ഇനിയും എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം ഉണ്ടെങ്കിൽ, നിങ്ങൾക്ക് ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യാം, തുടർന്ന് 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വയ്ക്കുക, എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം പരമാവധി നീക്കം ചെയ്യുക.

ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവലുകൾ:

വൈറൽ ഡിഎൻഎ&ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവൽ