പ്രശ്ന വിശകലന ഗൈഡ്

നിങ്ങൾ നേരിട്ടേക്കാവുന്ന പ്രശ്നങ്ങളുടെ ഇനിപ്പറയുന്ന വിശകലനംചെടി ആകെRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

സ്പിൻ കോളം അടഞ്ഞുപോയിരിക്കുന്നു

സ്പിൻ കോളത്തിന്റെ തടസ്സം RNA വിളവ് കുറയുകയോ അല്ലെങ്കിൽ RNA ലഭിക്കുന്നതിന് ശുദ്ധീകരിക്കാൻ കഴിയാതെ വരികയോ ചെയ്യും, കൂടാതെ ലഭിച്ച RNA യുടെ ഗുണനിലവാരം കുറവായിരിക്കും.

സാധാരണ കാരണ വിശകലനം:

1. സാമ്പിൾ പൂർണ്ണമായും തകർന്നിട്ടില്ല.

അപൂർണ്ണമായ സാമ്പിൾ വിഘടനത്തിന് ഡിഎൻഎ-ക്ലീനിംഗ് കോളം തടയാൻ കഴിയും, ഇത് ആർഎൻഎ വിളവിനെയും ഗുണനിലവാരത്തെയും ബാധിക്കും.സാമ്പിൾ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ നടത്തുമ്പോൾ, കോശഭിത്തികൾ, സാമ്പിളുകളുടെ കോശ സ്തരങ്ങൾ തുടങ്ങിയ കോശങ്ങളെ തകർക്കാൻ ആവശ്യമായ അളവിൽ ദ്രാവക നൈട്രജൻ വേഗത്തിൽ പൊടിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.പോളിഫെനോൾ പോളിസാക്രറൈഡുകളുടെ സസ്യ സാമ്പിളുകൾക്കായി, നിങ്ങൾ പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് പ്ലസ് ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

2.ഡിഎൻഎ-ക്ലീനിംഗ് കോളം ഒറ്റപ്പെട്ട സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ആസ്പിറേറ്റ് ചെയ്യുക, സാധ്യമായ സെൽ ഡിബ്രിസ് പെല്ലറ്റ് ആസ്പിറേറ്റ് ചെയ്യുക.

ആർഎൻഎ അഡ്‌സോർപ്‌ഷൻ നടപടിക്രമങ്ങളിൽ ആസ്പിറേറ്റഡ് സെൽ ഡിബ്രിസ് പെല്ലറ്റിന് ആർഎൻഎ-മാത്രം കോളം അടയാൻ കഴിയും (നടപടിക്രമത്തിന്റെ ഘട്ടം 5, പോളിസാക്രറൈഡ് പോളിഫെനോൾ നടപടിക്രമത്തിന്റെ ഘട്ടം 6 കാണുക).സെൽ അവശിഷ്ടങ്ങൾ ആസ്പിരേറ്റ് ചെയ്യപ്പെടാതിരിക്കാൻ ഈ സൂപ്പർനാറ്റന്റ് ആസ്പിറേറ്റ് ചെയ്യുമ്പോൾ ശ്രദ്ധിക്കണമെന്ന് ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

3. സാമ്പിളിന്റെ പ്രാരംഭ തുക വളരെ വലുതാണ്.

അമിതമായ സാമ്പിൾ ഉപയോഗം, ബഫർ PRL1 അല്ലെങ്കിൽ Buffer PSL1 വഴി സെല്ലുകളുടെ അപൂർണ്ണമായ സാമ്പിൾ വിഘടനത്തിനോ അപൂർണ്ണമായ ശിഥിലീകരണത്തിനോ കാരണമാകും, ഇത് ശുദ്ധീകരണ പ്രവർത്തനങ്ങൾക്കായി ഒരു അടഞ്ഞ ശുദ്ധീകരണ കോളത്തിന് കാരണമാകും.പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റിൽ ഒരു ഓപ്പറേറ്റഡ് സാമ്പിളിന്റെ ഒരു ശുദ്ധീകരണത്തിന് പ്രാരംഭ പരമാവധി 50 മില്ലിഗ്രാം ഉണ്ട്.പോളിഫെനോൾ പോളിസാക്രറൈഡുകളുടെ സസ്യ സാമ്പിളുകൾക്കായി, നിങ്ങൾ പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് പ്ലസ് പരീക്ഷിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

4. സെൻട്രിഫ്യൂജിന്റെ താപനില വളരെ കുറവാണ്.

സാമ്പിൾ ടിഷ്യുവിന്റെ ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ തടസ്സം ഒഴികെയുള്ള മുഴുവൻ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷനും ശുദ്ധീകരണവും, എല്ലാ ഘട്ടങ്ങളും ഊഷ്മാവിൽ (20-25 °C) നടത്തുന്നു.ചില താഴ്ന്ന താപനില സെൻട്രിഫ്യൂജുകൾക്ക് 20 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ താഴെയുള്ള താപനിലയുണ്ട്, ഇത് ഡിഎൻഎ-ക്ലീനിംഗ് കോളത്തിലും/അല്ലെങ്കിൽ ആർഎൻഎ-മാത്രം കോളത്തിലും തടസ്സങ്ങൾ ഉണ്ടാക്കും.ഇത് സംഭവിക്കുകയാണെങ്കിൽ, സെൻട്രിഫ്യൂജ് താപനില 20-25 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസായി സജ്ജീകരിക്കുകയും ലിസിസ് മിശ്രിതം കൂടാതെ/അല്ലെങ്കിൽ എത്തനോൾ വേർതിരിക്കൽ സൂപ്പർനാറ്റന്റ് 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലേക്ക് ചേർക്കുകയും ചെയ്യുക.

ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌റ്റുചെയ്യാത്തതോ ആർഎൻഎ വിളവ് കുറവോ അല്ല

വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമതയെ ബാധിക്കുന്ന നിരവധി ഘടകങ്ങളുണ്ട്, ഉദാഹരണത്തിന്: സാമ്പിൾ ആർഎൻഎ ഉള്ളടക്കം, പ്രവർത്തന രീതി, എല്യൂഷൻ വോളിയം മുതലായവ.

പൊതുവായ കാരണങ്ങളുടെ വിശകലനം ചുവടെ:

1.ഓപ്പറേഷൻ സമയത്ത് ഒരു ഐസ് ബാത്ത് അല്ലെങ്കിൽ താഴ്ന്ന താപനില (4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ്) സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തി.

നിർദ്ദേശം: മുഴുവൻ പ്രക്രിയയിലും ഊഷ്മാവിൽ (15-25 ° C) പ്രവർത്തിക്കുക, ഐസ് ബാത്ത്, താഴ്ന്ന താപനില സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ എന്നിവ ചെയ്യരുത്.

       2.സാമ്പിളിന്റെ അനുചിതമായ സംരക്ഷണം അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിളിന്റെ ദീർഘകാല സംരക്ഷണം കാരണം RNA നശിപ്പിച്ചു.

ശുപാർശ: പുതുതായി ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ദ്രാവക നൈട്രജനിൽ വേഗത്തിൽ ഫ്രീസുചെയ്യണം, തുടർന്ന് -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിക്കണം, സാമ്പിളുകൾ ആവർത്തിച്ച് മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും ഒഴിവാക്കുക;അല്ലെങ്കിൽ ഉടൻ തന്നെ സാമ്പിളുകൾ RNA സ്റ്റെബിലൈസർ RNAlater ലായനിയിൽ (മൃഗങ്ങളുടെ സാമ്പിളുകൾ) മുക്കിവയ്ക്കുക.

       3.അപര്യാപ്തമായ സാമ്പിൾ വിഘടനവും ലിസിസും ശുദ്ധീകരണ നിരയുടെ തടസ്സത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു.

നിർദ്ദേശം: ടിഷ്യു പൊടിക്കുമ്പോൾ, ടിഷ്യു വേണ്ടത്ര പൊടിച്ചിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക, അത് മുൻകൂട്ടി തയ്യാറാക്കിയ ബഫർ PSL1-ലേക്ക് വേഗത്തിൽ മാറ്റുക (β-ME യുടെ ശരിയായ അനുപാതം ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുക, നടപടിക്രമത്തിന്റെ ഘട്ടം 1 കാണുക).

4.എല്യൂന്റ് തെറ്റായി ചേർത്തു.

നിർദ്ദേശം: RNase-Free ddH ആണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക₂ശുദ്ധീകരണ കോളം മെംബ്രണിന്റെ നടുവിലേക്ക് O ഡ്രിപ്പ് ചെയ്യുന്നു.

5. ബഫർ പിഎസ്എൽ2 അല്ലെങ്കിൽ ബഫർ പിആർഡബ്ല്യു2 എന്നിവയിൽ കേവല എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർത്തിട്ടില്ല.

നിർദ്ദേശം: ദയവായി നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക, ബഫർ PSL2, Buffer PRW2 എന്നിവയിലേക്ക് സമ്പൂർണ്ണ എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർക്കുകയും കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി ഇളക്കുക.

6. ടിഷ്യു സാമ്പിളിന്റെ അളവ് അനുചിതമാണ്.

നിർദ്ദേശം: 500 μl ബഫർ PSL1 ന് 50 mg ടിഷ്യു ഉപയോഗിക്കുക.വളരെയധികം ടിഷ്യു ഉപയോഗിക്കുന്നത് ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിന്റെ അളവ് കുറയ്ക്കുകയും തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന ആർഎൻഎയുടെ പരിശുദ്ധിയും കുറയുകയും ചെയ്യും.പ്രാരംഭ സാമ്പിൾ ഡോസ് ഓരോ RNA എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ഓപ്പറേഷനും 50 mg കവിയാൻ പാടില്ല എന്ന് ഞങ്ങൾ ശക്തമായി ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

7. അനുചിതമായ എല്യൂഷൻ വോളിയം അല്ലെങ്കിൽ അപൂർണ്ണമായ എല്യൂഷൻ.

നിർദ്ദേശം: ശുദ്ധീകരണ നിരയുടെ എല്യൂന്റ് വോളിയം 50-200 μl ആണ്;എല്യൂഷൻ പ്രഭാവം തൃപ്തികരമല്ലെങ്കിൽ, മുൻകൂട്ടി ചൂടാക്കിയ RNase-Free ddH ചേർത്ത ശേഷം ഊഷ്മാവിൽ സമയം നീട്ടാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.₂O, 5-10മിനിറ്റ് പോലെ.

8. ബഫർ PRW2 ഉപയോഗിച്ച് കഴുകിയ ശേഷം ശുദ്ധീകരണ കോളത്തിൽ എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം ഉണ്ട്.

   നിർദ്ദേശം: ശൂന്യമായ ട്യൂബ് 1 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുകയും ബഫർ PRW2-ൽ കഴുകിയതിന് ശേഷവും എത്തനോൾ ശേഷിക്കുകയും ചെയ്താൽ, നിങ്ങൾക്ക് ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ സമയം 2 മിനിറ്റായി വർദ്ധിപ്പിക്കാം, അല്ലെങ്കിൽ ശേഷിക്കുന്ന എത്തനോൾ പൂർണ്ണമായി നീക്കം ചെയ്യാൻ 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ ശുദ്ധീകരണ കോളം സ്ഥാപിക്കുക.

9.കിറ്റ് തെറ്റായി ഉപയോഗിച്ചു.

   നിർദ്ദേശം: പോളിഫെനോളിക് പോളിസാക്രറൈഡുകളുടെ സസ്യ സാമ്പിളുകൾക്ക്, പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് പോലുള്ള സാധാരണ കിറ്റുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് അനുയോജ്യമായ ആർഎൻഎ സാമ്പിളുകൾ ലഭിക്കണമെന്നില്ല.പോളിഫിനോളിക് പോളിസാക്രറൈഡ് പ്ലാന്റ് സാമ്പിളുകൾക്കായി പ്രത്യേകം രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻകിറ്റ് പ്ലസ് ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.പോളിഫിനോൾ, പോളിസാക്രറൈഡ് പ്ലാന്റ് സാമ്പിളുകളിൽ നിന്ന് ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ പ്രത്യേകം വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത കിറ്റ്.

OD260/OD280 മൂല്യം കുറവാണ്

ഡിഡിഎച്ച് ഉള്ള ആർഎൻഎ എല്യൂഷൻ₂O ഉം സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ റീഡിംഗുകൾക്കായി ഉപയോഗിക്കുന്നതും കുറഞ്ഞ OD260/OD280 മൂല്യങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുന്നു.10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ഉപയോഗിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു (RNase-Free ddH-ന് പകരം₂O to elute RNA) താരതമ്യേന ശരിയായ OD260/OD280 മൂല്യങ്ങൾ ലഭിക്കുന്നതിന്, പേജ് 19-ലെ "RNA കോൺസെൻട്രേഷൻ ആൻഡ് പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ അസെയ്സ്" കാണുക.

ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ട ആർ.എൻ.എ

ശുദ്ധീകരിച്ച RNA യുടെ ഗുണനിലവാരം സാമ്പിൾ സംരക്ഷണം, RNase മലിനീകരണം, കൃത്രിമത്വം തുടങ്ങിയ ഘടകങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.

സാധാരണ കാരണങ്ങളുടെ വിശകലനം:

1. ശേഖരണത്തിന് ശേഷം ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ കൃത്യസമയത്ത് സംഭരിച്ചിട്ടില്ല.

    ശുപാർശ: ശേഖരണത്തിന് ശേഷം ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ യഥാസമയം ഉപയോഗിച്ചില്ലെങ്കിൽ, ദയവായി അവയെ താഴ്ന്ന ഊഷ്മാവിൽ ലിക്വിഡ് നൈട്രജനിൽ ഉടനടി സംഭരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ ദ്രാവക നൈട്രജനിൽ പെട്ടെന്ന് മരവിപ്പിച്ചതിന് ശേഷം ദീർഘകാല സംഭരണത്തിനായി -80 ° C ലേക്ക് മാറ്റുക, അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിളുകൾ RNA സ്റ്റെബിലൈസർ RNA ലേറ്റർ ലായനിയിൽ (മൃഗങ്ങളുടെ സാമ്പിളുകൾ) മുക്കിവയ്ക്കുക.ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ, പുതുതായി ശേഖരിച്ച ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

2. ടിഷ്യൂ സാമ്പിളുകളുടെ ആവർത്തിച്ചുള്ള മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും.

   നിർദ്ദേശം: ടിഷ്യൂ സാമ്പിളുകൾ സൂക്ഷിക്കുമ്പോൾ, അവയെ സംരക്ഷിക്കുന്നതിനായി ചെറിയ കഷണങ്ങളാക്കി മുറിച്ച്, സാമ്പിളുകൾ ആവർത്തിച്ചുള്ള മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും മൂലമുണ്ടാകുന്ന ആർ‌എൻ‌എയുടെ അപചയം ഒഴിവാക്കാൻ അവ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ അവയുടെ ഒരു ഭാഗം പുറത്തെടുക്കുന്നതാണ് നല്ലത്.

3.RNase ഓപ്പറേഷൻ റൂമിൽ അവതരിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു അല്ലെങ്കിൽ ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകൾ, മാസ്കുകൾ മുതലായവ ധരിക്കരുത്.

   നിർദ്ദേശം: ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പരീക്ഷണങ്ങൾ പ്രത്യേക ആർഎൻഎ പ്രവർത്തനങ്ങളിലാണ് ഏറ്റവും മികച്ചത്, പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് ലബോറട്ടറി ടേബിൾ വൃത്തിയാക്കണം, കൂടാതെ ആർ‌എൻ‌എസിന്റെ ആമുഖം മൂലമുണ്ടാകുന്ന ആർ‌എൻ‌എ അപചയം പരമാവധി ഒഴിവാക്കുന്നതിന് പരീക്ഷണ സമയത്ത് ഡിസ്പോസിബിൾ ഗ്ലൗസും മാസ്കുകളും ധരിക്കണം.

4.ഉപയോഗ സമയത്ത് RNase മുഖേന റിയാജൻറ് മലിനീകരിക്കപ്പെടുന്നു.

   നിർദ്ദേശം: അനുബന്ധ പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി സസ്യങ്ങളുടെ മൊത്തം RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ കിറ്റുകളുടെ ഒരു പുതിയ ശ്രേണി ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

5.ആർഎൻഎ കൃത്രിമത്വത്തിന് ഉപയോഗിക്കുന്ന സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകളും പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകളും RNase കൊണ്ട് മലിനമാണ്.

നിർദ്ദേശം: ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌ഷനിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, പൈപ്പറ്റ് നുറുങ്ങുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ തുടങ്ങിയവയെല്ലാം RNase-ഫ്രീ ആണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവലുകൾ:

പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ RNA ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവൽ