സെൽ ഡയറക്റ്റ് RT qPCR കിറ്റ്-SYBR ഗ്രീൻ I ഡയറക്ട് സെൽ ലിസിസ് സെൽ റെഡി ഒറ്റ-ഘട്ട qRT-PCR കിറ്റുകൾ
വിവരണങ്ങൾ
RT-qPCR പ്രതികരണങ്ങൾക്കായി കൾച്ചർഡ് സെൽ സാമ്പിളുകളിൽ നിന്ന് RNA വേഗത്തിൽ പുറത്തുവിടാൻ കഴിയുന്ന ഒരു അദ്വിതീയ ലിസിസ് ബഫർ സിസ്റ്റം ഈ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നു, അതുവഴി സമയമെടുക്കുന്നതും അധ്വാനിക്കുന്നതുമായ RNA ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയ ഇല്ലാതാക്കുന്നു.RNA ടെംപ്ലേറ്റ് വെറും 7 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ലഭിക്കും.5×നേരിട്ടുള്ള RT മിക്സും 2×കിറ്റ് നൽകുന്ന ഡയറക്ട് qPCR Mix-SYBR റിയാഗന്റുകൾക്ക് തത്സമയ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR ഫലങ്ങൾ വേഗത്തിലും ഫലപ്രദമായും ലഭിക്കും.
5×നേരിട്ടുള്ള RT മിക്സും 2×നേരിട്ടുള്ള qPCR മിക്സ്-SYBR-ന് ശക്തമായ ഇൻഹിബിറ്റർ ടോളറൻസ് ഉണ്ട്, കൂടാതെ സാമ്പിളുകളുടെ ലൈസേറ്റ് നേരിട്ട് RT-qPCR-ന്റെ ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിക്കാം.ഈ കിറ്റിൽ അദ്വിതീയ RNA ഹൈ-അഫിനിറ്റി ഫോർജീൻ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസും Hot D-Taq DNA പോളിമറേസും, dNTPs, MgCl എന്നിവയും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.2, പ്രതികരണ ബഫർ, PCR ഒപ്റ്റിമൈസർ, സ്റ്റെബിലൈസർ.
സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ
| ഭാഗം I | ബഫർ CL |
| ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് പ്ലസ് II | |
| ബഫർ എസ്.ടി | |
| ഭാഗം II | ഡിഎൻഎ ഇറേസർ |
| 5× ഡയറക്ട് ആർടി മിക്സ് | |
| 2× ഡയറക്ട് qPCR മിക്സ്-SYBR | |
| 50× ROX റഫറൻസ് ഡൈ | |
| RNase-Free ddH2O | |
| നിർദ്ദേശങ്ങൾ | |
സവിശേഷതകൾ & നേട്ടങ്ങൾ
■ലളിതവും ഫലപ്രദവും : സെൽ ഡയറക്ട് ആർടി സാങ്കേതികവിദ്യ ഉപയോഗിച്ച്, വെറും 7 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ ആർഎൻഎ സാമ്പിളുകൾ ലഭിക്കും.
■ സാമ്പിൾ ഡിമാൻഡ് ചെറുതാണ്, 10 സെല്ലുകൾ വരെ പരിശോധിക്കാം.
■ ഉയർന്ന ത്രൂപുട്ട്: 384, 96, 24, 12, 6-കിണർ പ്ലേറ്റുകളിൽ സംസ്കരിച്ച കോശങ്ങളിലെ ആർഎൻഎയെ വേഗത്തിൽ കണ്ടെത്താനാകും.
■ ഡിഎൻഎ ഇറേസറിന് റിലീസ് ചെയ്ത ജീനോമുകൾ വേഗത്തിൽ നീക്കം ചെയ്യാനും തുടർന്നുള്ള പരീക്ഷണ ഫലങ്ങളിലെ ആഘാതം ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കാനും കഴിയും.
■ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത RT, qPCR സിസ്റ്റം രണ്ട്-ഘട്ട RT-PCR റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനെ കൂടുതൽ കാര്യക്ഷമവും PCR കൂടുതൽ വ്യക്തവും RT-qPCR റിയാക്ഷൻ ഇൻഹിബിറ്ററുകളെ കൂടുതൽ പ്രതിരോധിക്കുന്നതുമാക്കുന്നു.
കിറ്റ് ആപ്ലിക്കേഷൻ
ആപ്ലിക്കേഷന്റെ വ്യാപ്തി: സംസ്ക്കരിച്ച സെല്ലുകൾ.
- സാമ്പിൾ ലിസിസ് മുഖേന RNA പുറത്തിറക്കിയതാണ്: ഈ കിറ്റിന്റെ RT-qPCR ടെംപ്ലേറ്റിന് മാത്രം ബാധകമാണ്.
- കിറ്റ് ഇനിപ്പറയുന്ന ആവശ്യങ്ങൾക്ക് ഉപയോഗിക്കാം: ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ വിശകലനം, siRNA-മെഡിയേറ്റഡ് ജീൻ സൈലൻസിംഗ് ഇഫക്റ്റിന്റെ സ്ഥിരീകരണം, മയക്കുമരുന്ന് സ്ക്രീനിംഗ് മുതലായവ.
ഡയഗ്രം
സംഭരണവും ഷെൽഫ് ജീവിതവും
ഈ കിറ്റിന്റെ ഭാഗം I 4 ഡിഗ്രിയിൽ സൂക്ഷിക്കണം;ഭാഗം II -20 ഡിഗ്രിയിൽ സൂക്ഷിക്കണം.
ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് പ്ലസ് II 4-ൽ സൂക്ഷിക്കണം℃, -20℃-ൽ ഫ്രീസ് ചെയ്യരുത്.
റീജന്റ് 2×നേരിട്ടുള്ള qPCR മിക്സ്-SYBR -20-ൽ സൂക്ഷിക്കണം℃ഇരുട്ടിൽ;ഇടയ്ക്കിടെ ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, അത് 4 ലും സൂക്ഷിക്കാംഹ്രസ്വകാല സംഭരണത്തിനായി ℃ (10 ദിവസത്തിനുള്ളിൽ ഉപയോഗിക്കുക).
റിയൽ ടൈം PCR പ്രൈമർ ഡിസൈൻ തത്വങ്ങൾ
ഫോർവേഡ് പ്രൈമറും റിവേഴ്സ് പ്രൈമറും
റിയൽ ടൈം പിസിആറിന്, പ്രൈമർ ഡിസൈൻ വളരെ പ്രധാനമാണ്.പ്രൈമറുകൾ പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ പ്രത്യേകതയും കാര്യക്ഷമതയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഇനിപ്പറയുന്ന തത്വങ്ങളെ പരാമർശിച്ച് രൂപകൽപ്പന ചെയ്യാൻ കഴിയും:
പ്രൈമർ ദൈർഘ്യം: 18-30 ബിപി.
GC ഉള്ളടക്കം: 40-60%.
Tm മൂല്യം: പ്രൈമർ 5 പോലുള്ള പ്രൈമർ ഡിസൈൻ സോഫ്‌റ്റ്‌വെയറിന് പ്രൈമറിന്റെ Tm മൂല്യം നൽകാൻ കഴിയും.അപ്‌സ്ട്രീം, ഡൗൺസ്ട്രീം പ്രൈമറുകളുടെ Tm മൂല്യങ്ങൾ കഴിയുന്നത്ര അടുത്തായിരിക്കണം.Tm കണക്കുകൂട്ടൽ ഫോർമുലയും ഉപയോഗിക്കാം: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).പിസിആർ നടത്തുമ്പോൾ, പ്രൈമർ ടിഎം മൂല്യമായ 5 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനു താഴെയുള്ള താപനിലയാണ് സാധാരണയായി അനീലിംഗ് താപനിലയായി തിരഞ്ഞെടുക്കുന്നത് (അനീലിംഗ് താപനിലയിലെ അനുബന്ധ വർദ്ധനവ് പിസിആർ പ്രതികരണത്തിന്റെ പ്രത്യേകത വർദ്ധിപ്പിക്കും).
പ്രൈമറുകളും PCR ഉൽപ്പന്നങ്ങളും:
ഡിസൈൻ പ്രൈമർ PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്ന ദൈർഘ്യം 100-150bp ആണ്.
ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ സെക്കണ്ടറി സ്ട്രക്ചറൽ ഏരിയയിൽ ഡിസൈൻ പ്രൈമറുകൾ കഴിയുന്നത്ര ഒഴിവാക്കണം.
അപ്‌സ്ട്രീം, ഡൗൺസ്ട്രീം പ്രൈമറുകളുടെ 3′ അറ്റങ്ങൾക്കിടയിൽ രണ്ടോ അതിലധികമോ കോംപ്ലിമെന്ററി ബേസുകൾ ഉണ്ടാകുന്നത് ഒഴിവാക്കുക.
പ്രൈമർ 3′ ടെർമിനൽ ബേസ് തുടർച്ചയായി 3 അധിക ജി അല്ലെങ്കിൽ സിയിൽ ഉണ്ടാകാൻ പാടില്ല.
പ്രൈമറുകൾക്ക് സ്വയം പൂരക ഘടനകൾ ഉണ്ടാകാൻ കഴിയില്ല, അല്ലാത്തപക്ഷം ഒരു ഹെയർപിൻ ഘടന രൂപം കൊള്ളും, ഇത് PCR ആംപ്ലിഫിക്കേഷനെ ബാധിക്കുന്നു.
ATCG പ്രൈമർ സീക്വൻസിൽ കഴിയുന്നത്ര തുല്യമായി വിതരണം ചെയ്യണം, കൂടാതെ 3′ ടെർമിനൽ ബേസ് ടി ആയി ഒഴിവാക്കണം.
അനുബന്ധം 1: സെൽ ഡയറക്ട് RT-qPCR കിറ്റ് ഘടക സപ്ലിമെന്റ് പായ്ക്ക്
1.സെൽ ലിസിസ് പരിഹാരം
|
| |||
| കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ (24-കിണർ ലിസിസ് സിസ്റ്റം / കിണർ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ടി | 500 ടി | ||
| ഭാഗംഐ | ബഫർ CL | 20 മില്ലി | 100 മില്ലി |
| ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് പ്ലസ് II | 400 μl | 1 മില്ലി × 2 | |
| ബഫർ എസ്.ടി | 1 മില്ലി × 2 | 10 മില്ലി | |
| ഭാഗംII | ഡിഎൻഎ ഇറേസർ | 400 μl | 1 മില്ലി × 2 |
2.RT മിക്സ്
|
| |
| കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ (20 μl പ്രതികരണ സംവിധാനം) | DRT-01011-B1 |
| 200 ടി | |
| 5× ഡയറക്ട് ആർടി മിക്സ് | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 മില്ലി × 2 |
|
| ||
| കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ (20 μl പ്രതികരണ സംവിധാനം) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ടി | 1000 ടി | |
| 2× ഡയറക്ട് qPCR മിക്സ്-SYBR | 1 മില്ലി × 2 | 1.7 മില്ലി × 6 |
| 50× ROX റഫറൻസ് ഡൈ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 മില്ലി | 10 മില്ലി |
ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവലുകൾ:
