ഫോർഡയറക്ട് RT-qPCR കിറ്റ്
വിവരണം
ഫോർഡയറക്ട് ആർടി-ക്യുപിസിആർ കിറ്റ് ആർഎൻഎ ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയകളില്ലാതെ സ്വാബ് ശേഖരണങ്ങളിൽ നിന്ന് ആർഎൻഎ നേരിട്ടുള്ള തൽസമയ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിട്ടുള്ളതാണ്.ഈ കിറ്റ് ഒരു മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ qRT-PCR സൈക്കിളുകൾ പൂർത്തിയാക്കുന്നു.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്, ആർനേസ് ഇൻഹിബിറ്റർ എന്നിവയുടെ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത മിശ്രിതമാണ് എൻസൈം മിക്സ്.ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത ബഫർ ഘടകങ്ങൾ, Mg ഉൾപ്പെടെ ആവശ്യമായ എല്ലാ ഘടകങ്ങളും പ്രതികരണ ബഫറിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.2+, dUTP, dNTP-കൾ.
സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ
100 ടി
കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ
ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് റിലീസ് ഏജന്റ് |
ആർഎൻഎ സംരക്ഷണം |
2× RT-qPCR ബഫർ |
എൻസൈം മിശ്രിതം(Taq&M-MLV) |
നിർദ്ദേശങ്ങൾ |
പിസിആർ ആപ്ലിക്കേഷൻ
1. പിസിആർ റിയാക്ഷൻ ട്യൂബുകൾ ഹ്രസ്വമായി സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തുകഴിഞ്ഞാൽ, അവയെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉപകരണത്തിന്റെ സാമ്പിൾ ടാങ്കിൽ വയ്ക്കുക.
2. തെർമൽ പ്രോട്ടോക്കോൾ
ഘട്ടം | താപനില | സമയം | സൈക്കിളുകൾ | |
1 | റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ | 50℃ | 15 മിനിറ്റ് | 1 |
2 | പ്രീ-ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 1 മിനിറ്റ് | 1 |
3 | ഡീനാറ്ററേഷൻ | 95℃ | 10 സെക്കൻഡ് | 42 |
4 | Anneal/Extension | 60℃ | 30 സെക്കൻഡ് |
കുറിപ്പ്:ഓരോ സൈക്കിളിന്റെയും വിപുലീകരണ ഘട്ടത്തിന് ശേഷം ഉടൻ തന്നെ ഫ്ലൂറസന്റ് സിഗ്നൽ കണ്ടെത്തി.
3. സജ്ജീകരിച്ച ശേഷം, ഫയൽ സംരക്ഷിച്ച് പ്രതികരണ പ്രോഗ്രാം പ്രവർത്തിപ്പിക്കുക.
പ്രവർത്തന ഘട്ടങ്ങൾ
റീജന്റ് തയ്യാറാക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, കിറ്റിലെ എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും ഊഷ്മാവിൽ ഉരുകുകയും സൌമ്യമായി കലർത്തുകയും വേണം.
റീജന്റ് തയ്യാറാക്കൽ
1. ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് റിലീസ് മിക്സ് തയ്യാറാക്കുക
ഘടകം | ഒരു സാമ്പിൾ അല്ലെങ്കിൽ നിയന്ത്രണം |
ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് റിലീസ് ഏജന്റ് | 5μL |
ആർഎൻഎ സംരക്ഷണം | 0.5 μL |
2. പ്രതികരണ മിക്സ് തയ്യാറാക്കുക
ഘടകം | ഒരു സാമ്പിൾ അല്ലെങ്കിൽ നിയന്ത്രണം |
2× RT-qPCR ബഫർ | 15 μL |
എൻസൈം മിശ്രിതം(Taq&M-MLV) | 1.5 μL |
പ്രൈമറുകളും പ്രോബുകളും | 1μL |
സംഭരണവും ഷെൽഫ് ജീവിതവും
കിറ്റ് -20-ൽ സൂക്ഷിക്കണം± 5℃.കാലാവധി 12 മാസമാണ്.
ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഥോ സൈക്കിളുകൾ (<5 സൈക്കിളുകൾ) ഒഴിവാക്കുക.