നേരിട്ടുള്ള RT-qPCR കിറ്റ് II
കിറ്റ് വിവരണം:
◮ഫോറെസി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസും ഫോറെസി എച്ച്എസ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസും ഉപയോഗിച്ച് ഡയറക്ട് ആർടി-ക്യുപിസിആർ കിറ്റ്, അതുല്യമായ പ്രതികരണ ബഫർ ഉപയോഗിച്ച്, ഈ കിറ്റിനെ ശക്തമായ പ്രതിരോധവും അനുയോജ്യതയും ഉള്ളതാക്കുന്നു, കൂടാതെ ഇതിന് ഫോരെജീൻ ലൈസിസ് സിസ്റ്റം ടെംപ്ലേറ്റായി റിയാക്ഷൻ ഉപയോഗം നേരിട്ട് പരിശോധിക്കാനും കഴിയും.ഈ കിറ്റിന് കോവിഡ്-19 ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റിനും മറ്റ് രോഗകാരികളായ ബാക്ടീരിയ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് വികസനത്തിനും അപേക്ഷിക്കാം.
വിവരണം
നേരിട്ടുള്ള RT-qPCR കിറ്റ് പ്രത്യേകം പാക്കേജുചെയ്ത RT-qPCR ബഫർ നൽകുന്നു, ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമതയുള്ള ഫോറസി HS Taq DNA പോളിമറേസ്കൂടാതെ ഫോറെസി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് (എംഎംഎൽവി),ലളിതമായ പരിശോധനയ്ക്കുള്ളിൽ ബാക്ക്-എൻഡ് കിറ്റുകൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിനും സിസ്റ്റം ക്രമീകരിക്കുന്നതിനും ഇത് സൗകര്യപ്രദമാക്കുന്നു.
ഫോറെസി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസും ഫോറെസി എച്ച്എസ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസും ഉപയോഗിച്ച് ഡയറക്ട് ആർടി-ക്യുപിസിആർ കിറ്റ്, അതുല്യമായ പ്രതികരണ ബഫർ ഉപയോഗിച്ച്, ഈ കിറ്റിനെ ശക്തമായ പ്രതിരോധവും അനുയോജ്യതയും ഉള്ളതാക്കുന്നു, കൂടാതെ ഇതിന് ഫോരെജീൻ ലൈസിസ് സിസ്റ്റം ടെംപ്ലേറ്റായി റിയാക്ഷൻ ഉപയോഗം നേരിട്ട് പരിശോധിക്കാനും കഴിയും.ഈ കിറ്റിന് കോവിഡ്-19 ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റിനും മറ്റ് രോഗകാരികളായ ബാക്ടീരിയ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് വികസനത്തിനും അപേക്ഷിക്കാം.
എളുപ്പത്തിലും വേഗത്തിലും ഉപയോഗിച്ച് ഈ കിറ്റ് നേരിട്ട് IVD ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ ഘടകമാകാം.ഇത് വീണ്ടും വികസിപ്പിക്കാതെ, എളുപ്പമുള്ള സ്ഥിരീകരണം മാത്രമേ ആവശ്യമുള്ളൂ.
സ്പെസിഫിക്കേഷനുകൾ
500T, 50,000T
കിറ്റ് ഘടകങ്ങൾ
| കിറ്റ് ഉള്ളടക്കങ്ങൾ (20 μL പ്രതികരണ സംവിധാനം) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ടി | 50,000 ടി | |
| ഫോർസി ആർഎവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് (200 U/μL) | 50 μL× 1 | 1 മി.ലി× 5 |
| ഫോറെസി എച്ച്എസ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് (5 U/μL) | 100 μL× 1 | 1 മി.ലി× 10 |
| 2× ഡയറക്ട് RT-qPCRബഫർ | 1 മില്ലി × 5 | 500 മില്ലി × 1 |
| നിർദ്ദേശം | 1 | 1 |
പ്രവർത്തന ഘട്ടങ്ങൾ
A: ടെംപ്ലേറ്റും റിയാക്ടറും തയ്യാറാക്കുക
1. തയ്യാറാക്കിയ RNA ടെംപ്ലേറ്റ് തയ്യാറാക്കുക (ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് വേർതിരിച്ചെടുക്കാനും ശുദ്ധീകരിക്കാനും ഫോർജീൻ ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് സീരീസ് കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു) അല്ലെങ്കിൽ സാമ്പിൾ ക്രാക്കിംഗ് ഉൽപ്പന്നം (ഫോറെജീൻ ലൈസിസ് സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു), നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകൾ (10 μM) കൂടാതെ മറ്റ് പ്രസക്തമായ ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾ, ഉപകരണം.
2. 2× ഡയറക്ട് RT-qPCR ബഫർ, RNase-Free ddH2O, 20× ROX റഫറൻസ് ഡൈ (ആവശ്യമെങ്കിൽ) എന്നിവ ഐസ് ഉള്ള ബോക്സിൽ ഇടുക, ഇവ സ്വാഭാവികമായി ഉരുകുകയും സൌമ്യമായി മിക്സ് ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു.
ബി: RT-qPCR സിസ്റ്റം തയ്യാറാക്കുക
പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിന്റെ പ്രതിപ്രവർത്തന ബഫറിന്റെ പകുതി വോളിയം നേടുക (ഉദാഹരണത്തിന്, സിസ്റ്റത്തിന്റെ വോളിയം 20 μL ആണെങ്കിൽ, അതിന് 10 μL 2× ഡയറക്ട് RT-qPCR ബഫർ ലഭിക്കേണ്ടതുണ്ട്.). വേണ്ടിഎൻസൈമിന്റെ അനുബന്ധ അളവ്, ഞങ്ങൾ അത് നിർദ്ദേശിക്കുന്നുM-MLV: 10-30 U/20 μL പ്രതികരണ സംവിധാനം,ടാഖ്ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്：1-2 U/20 μL പ്രതികരണ സംവിധാനംഇതാണ് ഞങ്ങളുടെ നിർദ്ദേശം, നിങ്ങൾ ഇത് പരീക്ഷിച്ച് ക്രമീകരിക്കണം), ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ്, നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകൾ, പ്രോബുകൾ എന്നിവ ചേർക്കുക, കൂടാതെ RNase-Free ddH ചേർക്കുക2O മുതൽ 20 μL വരെ.RT-qPCR പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിന്റെ നിർദ്ദിഷ്ട തയ്യാറെടുപ്പ് ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടിക 1-ലേക്ക് പരാമർശിക്കാം.
പട്ടിക 1 : RT-qPCR സിസ്റ്റം തയ്യാറാക്കുക
| ഘടകം | വ്യാപ്തം | അന്തിമ ഏകാഗ്രത |
| 2× ഡയറക്ട് RT-qPCR ബഫർ | 10 μL | 1× |
| ഫോർയേസി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് (എംഎംഎൽവി) | 10-30 യു | |
| ഫോറെസി എച്ച്എസ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് | 1-2 യു | |
| ഫോർവേഡ് പ്രൈമർ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| റിവേഴ്സ് പ്രൈമർ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| അന്വേഷണം(4 μM) | 1 μL | 200nM |
| ടെംപ്ലേറ്റ്(ആർഎൻഎ അല്ലെങ്കിൽ ലൈസേറ്റ്) | X μL | |
| 20× ROX റഫറൻസ് ഡൈ | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| ആകെ വോളിയം | 20 μL |
ശ്രദ്ധിക്കുക: ഫോർവേഡ് പ്രൈമറും റിവേഴ്സ് പ്രൈമറും ടാർഗെറ്റ് ജീനിന്റെ പ്രത്യേക പ്രൈമറുകളാണ്.qPCR-ന്റെ സിസ്റ്റം പ്രായോഗിക പരീക്ഷണാത്മകവും PCR മോഡലുകളും അനുസരിച്ച് ക്രമീകരിക്കാവുന്നതാണ്.മിക്ക പ്രൈമറുകളുടെയും അന്തിമ സാന്ദ്രതയ്ക്കായി ഞങ്ങൾ 400nM ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.തയ്യാറാക്കിയ കോൺസൺട്രേഷനും ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന അന്തിമ കോൺസൺട്രേഷനും അനുസരിച്ച് നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകളുടെയും പ്രോബുകളുടെയും വോളിയം ക്രമീകരിക്കുക.
1*: വ്യത്യസ്‌ത അളവിലുള്ള PCR ഉപകരണങ്ങൾക്ക് അനുസൃതമായി ROX റഫറൻസ് ഡൈയുടെ അനുയോജ്യമായ അന്തിമ സാന്ദ്രത തിരഞ്ഞെടുക്കുക.സാധാരണ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR ഉപകരണങ്ങളുടെ ഒപ്റ്റിമൽ ROX റഫറൻസ് ഡൈ കോൺസൺട്രേഷൻ ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു:
| ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ ഉപകരണങ്ങൾ | ROX റഫറൻസ് ഡൈയുടെ അന്തിമ സാന്ദ്രത |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/ഘട്ടം ഒന്ന്,തുടങ്ങിയവ. | 1× (ഉദാഹരണത്തിന്, 20 μL പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൽ 1μl 20×ROX റഫറൻസ് ഡൈ ചേർക്കുക) |
| ABI 7500, 7500 ഫാസ്റ്റ്, സ്ട്രാറ്റജീൻ Mx3000P, Mx3005P, Mx4000 മുതലായവ. | 0.5× (ഉദാഹരണത്തിന്, 20 μL പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൽ 0.5μl 20×ROX റഫറൻസ് ഡൈ ചേർക്കുക) |
| റോച്ചെ PCR ഉപകരണം, ബയോ-റാഡ് PCR ഉപകരണം, Eppendorf ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR ഉപകരണം, മുതലായവ. | ROX റഫറൻസ് ഡൈ ഇല്ലാതെ |
സംഭരണവും ഷെൽഫ് ജീവിതവും
കിറ്റ് -20 ± 5℃-ൽ സൂക്ഷിക്കണം.ഇത് ഉടനെ -20 ℃ തെർമോസ്റ്റാറ്റിക് റഫ്രിജറേറ്ററിൽ സൂക്ഷിക്കണം.അനുയോജ്യമായ അവസ്ഥയിൽ സൂക്ഷിക്കുകയാണെങ്കിൽ സാധുത കാലയളവ് 2 വർഷമാണ്.
