പ്രശ്ന വിശകലന ഗൈഡ്

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

കുറഞ്ഞ വിളവ് അല്ലെങ്കിൽ ഡിഎൻഎ ഇല്ല

സാമ്പിളിന്റെ ഉറവിടം, സാമ്പിളിന്റെ പ്രായം, സാമ്പിളിന്റെ സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ, പ്രവർത്തനം എന്നിവ ഉൾപ്പെടെ ജനിതക ഡിഎൻഎയുടെ വിളവിനെ ബാധിക്കുന്ന നിരവധി ഘടകങ്ങളുണ്ട്.

വേർതിരിച്ചെടുക്കുമ്പോൾ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ലഭിക്കില്ല

1. ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ അനുചിതമായി സൂക്ഷിക്കുകയോ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു, ഇത് ജനിതക ഡിഎൻഎയുടെ അപചയത്തിന് കാരണമാകുന്നു.

ശുപാർശ: ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ അല്ലെങ്കിൽ -20 ൽ സംഭരിക്കുക°സി;ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ പുതുതായി ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

2. വളരെ കുറച്ച് സാമ്പിൾ തുക അനുബന്ധ ജനിതക ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാതിരിക്കാൻ ഇടയാക്കും.

നിർദ്ദേശം: വളരെക്കാലം സൂക്ഷിച്ചിരിക്കുന്ന അല്ലെങ്കിൽ ഗുരുതരമായ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ഡീഗ്രേഡേഷൻ ഉള്ള ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾക്ക്, ഗണ്യമായ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ ടിഷ്യു സാമ്പിളുകളുടെ അളവ് ഉചിതമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാം.ഡിഎൻഎ ആവശ്യങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് സാമ്പിളിന്റെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കാവുന്നതാണ്, എന്നാൽ പുതിയ സാമ്പിൾ 100mg കവിയാൻ പാടില്ല, ഉണങ്ങിയ സാമ്പിൾ 30mg കവിയാൻ പാടില്ല.

3. സാമ്പിൾ ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് പൊടിക്കുകയോ ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ കഴിഞ്ഞ് വളരെക്കാലം വയ്ക്കുകയോ ചെയ്യുന്നില്ല.

നിർദ്ദേശം: ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന സമയത്ത്, കോശഭിത്തി തകർക്കാൻ സാമ്പിൾ പൂർണ്ണമായും ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് പൊടിക്കേണ്ടതുണ്ട്;പൊടിച്ചതിന് ശേഷം, സാമ്പിൾ പൊടി 65-ൽ പ്രീഹീറ്റ് ചെയ്ത PL1-ലേക്ക് മാറ്റുക°C കഴിയുന്നത്ര വേഗം (നിലം പൊടി ഉരുകിക്കഴിഞ്ഞാൽ, ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ അതിവേഗം നശിക്കാൻ തുടങ്ങും) .

4. ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ തെറ്റായ സംഭരണം പ്രവർത്തനം കുറയുകയോ നിർജ്ജീവമാക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു.

ശുപാർശ: ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ സ്ഥിരീകരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈമാറ്റിക് ഹൈഡ്രോളിസിനായി ഒരു പുതിയ ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

5. കിറ്റ് തെറ്റായി സംഭരിക്കുകയോ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു, ഇത് കിറ്റിലെ ചില ഘടകങ്ങൾ പരാജയപ്പെടുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു.

ശുപാർശ: അനുബന്ധ പ്രവർത്തനങ്ങൾക്കായി ഒരു പുതിയ പ്ലാന്റ് ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റ് വാങ്ങുക.

6. കിറ്റിന്റെ തെറ്റായ ഉപയോഗം.

നിർദ്ദേശം: സസ്യ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിനും ശുദ്ധീകരിക്കുന്നതിനുമായി സാമ്പിളുകൾക്കായി സമർപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ഒരു പ്ലാന്റ് ഡിഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് വാങ്ങുക.

7. ഒരു ചേർക്കാതെ തന്നെ ബഫർ WBജലരഹിതമായ എത്തനോൾ.

ശുപാർശ: ബഫർ ഡബ്ല്യുബിയിലേക്ക് കേവല എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർക്കുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക.

8. സിലിക്ക മെംബ്രണിലേക്ക് എല്യൂവെന്റ് കൃത്യമായി ഒഴിച്ചില്ല.

നിർദ്ദേശം: 65-ൽ മുൻകൂട്ടി ചൂടാക്കിയ എല്യൂന്റ് ചേർക്കുക℃സിലിക്ക ജെൽ മെംബ്രണിന്റെ മധ്യഭാഗത്തേക്ക് ഡ്രോപ്പ്വൈസ് ചെയ്യുക, എല്യൂഷൻ കാര്യക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വയ്ക്കുക.

കുറഞ്ഞ വിളവ് നൽകുന്ന ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ലഭിക്കാൻ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ

1. സാമ്പിൾ അനുചിതമായി സൂക്ഷിക്കുകയോ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു, ഇത് ജനിതക ഡിഎൻഎയുടെ അപചയത്തിന് കാരണമാകുന്നു.

ശുപാർശ: ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ -20-ൽ സൂക്ഷിക്കുക℃;ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ പുതുതായി ശേഖരിച്ച ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

2. ടിഷ്യു സാമ്പിളുകളുടെ അളവ് വളരെ ചെറുതാണെങ്കിൽ, വേർതിരിച്ചെടുത്ത ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ കുറവായിരിക്കും.

നിർദ്ദേശം: ചില ചെടികളുടെ സാമ്പിളുകൾ ജലത്താൽ സമ്പുഷ്ടമാണ്, ആൽഗകൾ പോലുള്ള ജലസസ്യങ്ങൾ മുതലായവ, അളവ് ഉചിതമായി വർദ്ധിപ്പിക്കുകയോ അല്ലെങ്കിൽ ഓപ്പറേഷന് മുമ്പ് വെള്ളം കുറച്ച് നിർജ്ജലീകരണം ചെയ്യുകയോ ചെയ്യാം.

3. സാമ്പിളുകൾ ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ ഉപയോഗിച്ച് നന്നായി പൊടിച്ചില്ല അല്ലെങ്കിൽ പൊടിച്ചതിന് ശേഷം വളരെ നേരം ഊഷ്മാവിൽ അവശേഷിക്കുന്നു.

നിർദ്ദേശം: ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ പൊടിക്കൽ മതിയായതായിരിക്കണം, സാമ്പിൾ സെൽ മതിൽ കഴിയുന്നത്ര തകർക്കണം;പൊടിച്ച ഉടൻ, സാമ്പിൾ പൊടി 65 ലേക്ക് മാറ്റണം℃അടുത്ത ഘട്ടത്തിനായി മുൻകൂട്ടി ചൂടാക്കിയ ബഫർ PL1.

4. ശരിയായ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നില്ല.

ശുപാർശ: പ്ലാന്റ് ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാനും ശുദ്ധീകരിക്കാനും ഒരു പ്രത്യേക പ്ലാന്റ് ഡിഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുക.

5. ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ തെറ്റായ സംഭരണം പ്രവർത്തനം കുറയുകയോ നിർജ്ജീവമാക്കുകയോ ചെയ്യുന്നു.

ശുപാർശ: ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ സ്ഥിരീകരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈമാറ്റിക് ഹൈഡ്രോളിസിനായി ഒരു പുതിയ ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

6. എല്യൂന്റ് പ്രശ്നം

ശുപാർശ: എല്യൂഷനു വേണ്ടി ദയവായി ബഫർ EB ഉപയോഗിക്കുക;ddH ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ₂O അല്ലെങ്കിൽ മറ്റ് എല്യൂമെന്റുകൾ, എല്യൂയന്റിന്റെ pH 7.0-8.5 ഇടയിലാണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

7. എല്യൂന്റ് ശരിയായി ഡ്രിപ്പ് ചെയ്തിട്ടില്ല

നിർദ്ദേശം: എല്യൂഷൻ കാര്യക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന്, ദയവായി സിലിക്ക മെംബ്രണിന്റെ മധ്യഭാഗത്ത് എല്യൂഷൻ ഡ്രോപ്പ് ചേർക്കുകയും ഊഷ്മാവിൽ 5 മിനിറ്റ് വിടുകയും ചെയ്യുക.

8. എല്യൂന്റ് വോളിയം വളരെ ചെറുതാണ്

നിർദ്ദേശം: 100-ൽ കുറയാത്ത നിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസൃതമായി ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എല്യൂഷന് വേണ്ടി എല്യൂഷൻ ഉപയോഗിക്കുകμl.

കുറഞ്ഞ ശുദ്ധിയുള്ള ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുത്തു

ജീനോമിക് ഡിഎൻഎയുടെ കുറഞ്ഞ പരിശുദ്ധി താഴെയുള്ള പരീക്ഷണങ്ങളുടെ പരാജയത്തിലേക്കോ മോശം ഫലത്തിലേക്കോ നയിക്കും, ഇനിപ്പറയുന്നവ: എൻസൈം മുറിക്കാൻ കഴിയില്ല, ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ശകലം പിസിആർ വഴി നേടാനാവില്ല.

1. വിവിധ പ്രോട്ടീൻ മലിനീകരണം, RNA മലിനീകരണം.

വിശകലനം: കോളം കഴുകാൻ ബഫർ PW ഉപയോഗിച്ചിട്ടില്ല;ശരിയായ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വേഗതയിൽ കോളം കഴുകാൻ ബഫർ PW ഉപയോഗിച്ചില്ല.

നിർദ്ദേശം: നിരയിലൂടെ സൂപ്പർനാറ്റന്റ് കടന്നുപോകുമ്പോൾ സൂപ്പർനറ്റന്റിൽ ഒരു മഴയും ഇല്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കാൻ ശ്രമിക്കുക;നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച് ബഫർ PW ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക, ഈ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കാനാവില്ല.

2. അശുദ്ധി അയോൺ മലിനീകരണം.

വിശകലനം: ബഫർ WB വാഷ് കോളം ഒഴിവാക്കി അല്ലെങ്കിൽ ഒരിക്കൽ മാത്രം കഴുകി, ശേഷിക്കുന്ന അയോണിക് മലിനീകരണത്തിന് കാരണമായി.

ശുപാർശ: ശേഷിക്കുന്ന അയോണുകൾ പരമാവധി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനുള്ള നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച് ബഫർ WB ഉപയോഗിച്ച് രണ്ടുതവണ കഴുകുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക.

3. RNase മലിനീകരണം.

വിശകലനം: Exogenous RNase ബഫറിലേക്ക് ചേർത്തു;ബഫർ പിഡബ്ല്യുവിലെ തെറ്റായ വാഷിംഗ് ഓപ്പറേഷൻ ശേഷിക്കുന്ന RNase-ന് കാരണമാകുകയും ഇൻ വിട്രോ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പോലുള്ള ഡൗൺസ്ട്രീം RNA പരീക്ഷണ പ്രവർത്തനങ്ങളെ ബാധിക്കുകയും ചെയ്യും.

നിർദ്ദേശം: ഫോർജീൻ സീരീസ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ കിറ്റുകൾക്ക് അധിക RNase ഇല്ലാതെ RNA നീക്കം ചെയ്യാൻ കഴിയും, കൂടാതെ പ്ലാന്റ് DNA ഐസൊലേഷൻ കിറ്റിലെ എല്ലാ റിയാജന്റുകൾക്കും RNase ആവശ്യമില്ല;നിർദ്ദേശങ്ങൾ അനുസരിച്ച് ബഫർ PW ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക, ഈ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കാനാവില്ല.

4. എത്തനോൾ അവശിഷ്ടങ്ങൾ.

വിശകലനം: ബഫർ ഡബ്ല്യുബി ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകിയ ശേഷം, ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തിയില്ല.

ശുപാർശ: ശരിയായ ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷനായി നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക.

നിർദേശ പുസ്തകം:

പ്ലാന്റ് ഡിഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവൽ