A260/A230 ന്റെ കുറഞ്ഞ അനുപാതം സാധാരണയായി 230nm ൽ പരമാവധി ആഗിരണം തരംഗദൈർഘ്യമുള്ള മാലിന്യങ്ങൾ മൂലമാണ് ഉണ്ടാകുന്നത്.ഈ മാലിന്യങ്ങൾ എന്തൊക്കെയാണെന്ന് നോക്കാം:

• സാധാരണ മലിനീകരണം	ആഗിരണം തരംഗദൈർഘ്യം	അനുപാത പ്രഭാവം
  പ്രോട്ടീൻ	~230nm ഉം 280nm ഉം	എ യുടെ ഒരേസമയം കുറയ്ക്കൽ260/A 280കൂടാതെ എ260/A 280അനുപാതങ്ങൾ
  ഗ്വാനിഡിൻ ഉപ്പ്	220-240 എൻഎം	എ കുറയ്ക്കുക260/A 280അനുപാതം
  ഫിനോൾ	~270nm	-
  ട്രൈസോൾ	~230nm ഉം 270nm ഉം	എ കുറയ്ക്കുക260/A 280അനുപാതം
  EDTA	~230nm	എ കുറയ്ക്കുക260/A 280അനുപാതം
  എത്തനോൾ	230-240 എൻഎം	എ കുറയ്ക്കുക260/A 280അനുപാതം

 
 
 
സാധാരണ മലിനീകരണത്തിന്റെ ആഗിരണ തരംഗദൈർഘ്യവും കോൺട്രാസ്റ്റ് മൂല്യവും

Pറോട്ടീൻ മലിനീകരണം
ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയയിലെ ഏറ്റവും സാധാരണമായ മലിനീകരണമായി പ്രോട്ടീൻ മലിനീകരണത്തെ കണക്കാക്കാം.മുകളിലെ ജലീയ ഘട്ടത്തിനും താഴെക്കും ഇടയിലാണ് പ്രോട്ടീൻ നിലനിൽക്കുന്നത്ജൈവഘട്ടം.മലിനീകരണം ഒരേ സമയം A260/A280, A260/A230 എന്നിവയുടെ അനുപാതം കുറയ്ക്കും, A260/A230 എന്ന അനുപാതം A260/A280 എന്ന അനുപാതത്തേക്കാൾ വ്യക്തമായും മാറും.
തുടർന്നുള്ള സമയത്ത്റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻor qPCR പ്രതികരണങ്ങൾ, പ്രോട്ടീൻ അവശിഷ്ടങ്ങൾ എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തുകയോ തടസ്സപ്പെടുത്തുകയോ ചെയ്യും.പ്രോട്ടീൻ മലിനീകരണം ഒഴിവാക്കാനുള്ള ഏറ്റവും നല്ല മാർഗം, സൂപ്പർനാറ്റന്റ് കഴിക്കുമ്പോൾ "കൂടുതൽ കുറവ്, ഒരു ചെറിയ തുക പല തവണ" എന്ന തത്വം മനസ്സിൽ സൂക്ഷിക്കുക എന്നതാണ്.

2. ഗ്വാനിഡിനിയം മലിനീകരണം
ഹൈഡ്രോക്ലോറൈഡ് (GuHCl), ഗ്വാനിഡൈൻ തയോസയനേറ്റ് (GTC) എന്നിവയ്ക്ക് പ്രോട്ടീനുകളെ നിർവീര്യമാക്കുന്ന ഫലമുണ്ട്, ഇത് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയയിൽ കോശ സ്തരങ്ങളെ പെട്ടെന്ന് നശിപ്പിക്കുകയും പ്രോട്ടീൻ ഡീനാറ്ററേഷനും മഴയും ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യും.GuHCl, GTC എന്നിവയുടെ ആഗിരണം തരംഗദൈർഘ്യം 220-240 nm ആണ്.ശേഷിക്കുന്ന ഗ്വാനിഡിനിയം ഉപ്പ് A260/A230 എന്ന അനുപാതം കുറയ്ക്കും.ശേഷിക്കുന്ന ഗ്വാനിഡിനിയം ഉപ്പ് അനുപാതം കുറയ്ക്കുമെങ്കിലും,താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളിലെ സ്വാധീനം യഥാർത്ഥത്തിൽ നിസ്സാരമാണ്.

3. ട്രൈസോൾ മലിനീകരണം
ട്രൈസോളിന്റെ പ്രധാന ഘടകം ഫിനോൾ ആണ്.കോശങ്ങളെ ലൈസ് ചെയ്യുകയും കോശങ്ങളിലെ പ്രോട്ടീനുകളും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് പദാർത്ഥങ്ങളും പുറത്തുവിടുകയും ചെയ്യുക എന്നതാണ് ഫിനോളിന്റെ പ്രധാന പ്രവർത്തനം.ഫിനോളിന് പ്രോട്ടീനുകളെ ഫലപ്രദമായി ഇല്ലാതാക്കാൻ കഴിയുമെങ്കിലും, RNase പ്രവർത്തനത്തെ പൂർണ്ണമായി തടയാൻ അതിന് കഴിയില്ല.അതിനാൽ, 8-ഹൈഡ്രോക്സിക്വിനോലിൻ, ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ്, β-മെർകാപ്ടോഎഥനോൾ മുതലായവ എൻഡോജെനസ്, എക്സോജനസ് RNase-നെ തടയാൻ TRIzol-ൽ ചേർക്കുന്നു.
സെല്ലുലാർ ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌റ്റുചെയ്യുമ്പോൾ, ട്രൈസോളിന് കോശങ്ങളെ വേഗത്തിൽ ലൈസ് ചെയ്യാനും കോശങ്ങളിൽ നിന്ന് പുറത്തുവിടുന്ന ന്യൂക്ലീസിനെ തടയാനും കഴിയും, ശേഷിക്കുന്ന ട്രൈസോൾ A260/A230 അനുപാതം ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കും.
പ്രോസസ്സിംഗ് രീതി: സെൻട്രിഫ്യൂജിംഗ് ചെയ്യുമ്പോൾ, ട്രൈസോളിലെ ഫിനോൾ 4 ഡിഗ്രിയിലും മുറിയിലെ താപനിലയിലും ജല ഘട്ടത്തിൽ എളുപ്പത്തിൽ ലയിക്കുമെന്നത് ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്.

4. എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം
ഡിഎൻഎയുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചേക്കാവുന്ന ഉപ്പ് അയോണുകളെ ലയിപ്പിക്കുമ്പോൾ ഡിഎൻഎയെ അവശിഷ്ടമാക്കാൻ അന്തിമ പ്രക്രിയയിൽ എത്തനോൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.ഏറ്റവും ഉയർന്ന ആഗിരണ തരംഗദൈർഘ്യംആഗിരണം കൊടുമുടിഎത്തനോൾ 230-240 nm ആണ്A260/A230 എന്ന അനുപാതവും കുറയ്ക്കും.
എഥനോൾ അവശിഷ്ടം ഒഴിവാക്കുന്ന രീതി അവസാന എലൂഷൻ സമയത്ത് രണ്ട് തവണ ആവർത്തിക്കാം.ഫ്യൂം ഹുഡ്എല്യൂഷനായി ബഫർ ചേർക്കുന്നതിന് മുമ്പ് എത്തനോൾ പൂർണ്ണമായി ബാഷ്പീകരിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നതിന് രണ്ട് മിനിറ്റ്.
എന്നിരുന്നാലും, ഈ അനുപാതം RNA ഗുണനിലവാരത്തിന്റെ ഒരു മൂല്യനിർണ്ണയ സൂചിക മാത്രമാണെന്ന് അറിഞ്ഞിരിക്കണം.മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ച പ്രവർത്തനങ്ങൾ കർശനമായി നിയന്ത്രിക്കുകയാണെങ്കിൽ, അനുപാതവും സ്റ്റാൻഡേർഡ് ശ്രേണിയും തമ്മിലുള്ള വ്യതിയാനം താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ വലിയ സ്വാധീനം ചെലുത്തില്ല.
ബന്ധപ്പെട്ട ഉല്പന്നങ്ങൾ:
അനിമൽ ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ്
പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ്
സെൽ ടോട്ടൽ RNA ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ്
പ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ RNA ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് പ്ലസ്