പ്രശ്നങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്യുന്നതിനുള്ള ഗൈഡുകൾ

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ കഴിയില്ല അല്ലെങ്കിൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ വിളവ് കുറവാണ്

വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമതയെ ബാധിക്കുന്ന നിരവധി ഘടകങ്ങളുണ്ട്, ഉദാഹരണത്തിന്: സാമ്പിൾ ആർഎൻഎ ഉള്ളടക്കം, പ്രവർത്തന രീതി, എല്യൂഷൻ വോളിയം മുതലായവ.

പൊതുവായ കാരണങ്ങളുടെ വിശകലനം:

1.ഓപ്പറേഷൻ സമയത്ത് ഐസ് ബാത്ത് അല്ലെങ്കിൽ താഴ്ന്ന താപനില (4 ° C) സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ.

നിർദ്ദേശം: മുറിയിലെ താപനില (15-25 ° C) പ്രവർത്തനം, ഒരിക്കലും ഐസ് ബാത്ത്, താഴ്ന്ന താപനില സെൻട്രിഫ്യൂജ്.

2. അനുചിതമായ സാമ്പിൾ സംഭരണം അല്ലെങ്കിൽ വളരെ നേരം സാമ്പിൾ സംഭരണം.

നിർദ്ദേശം: -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സാമ്പിളുകൾ സംഭരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ ലിക്വിഡ് നൈട്രജനിൽ ഫ്രീസ് ചെയ്യുക, ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഥോ ഉപയോഗം ഒഴിവാക്കുക;ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ പുതുതായി ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

3.അപര്യാപ്തമായ സാമ്പിൾ ലിസിസ്

ശുപാർശ: സാമ്പിളും വർക്കിംഗ് സൊല്യൂഷനും (ലീനിയർ അക്രിലമൈഡ്) നന്നായി കലർത്തി ഊഷ്മാവിൽ (15-25 ° C) 10 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

4.എല്യൂന്റ് തെറ്റായി ചേർത്തു

ശുപാർശ: RNase-Free ddH2O ശുദ്ധീകരണ നിരയുടെ മെംബ്രണിന്റെ മധ്യത്തിൽ ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക

5.ബഫർ viRW2 ലെ അൺഹൈഡ്രസ് എത്തനോളിന്റെ തെറ്റായ അളവ്

നിർദ്ദേശം: ദയവായി നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക, ബഫർ viRW2-ലേക്ക് അൺഹൈഡ്രസ് എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർക്കുക, കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് അവ നന്നായി ഇളക്കുക.

6.അനുചിതമായ സാമ്പിൾ ഉപയോഗം.

നിർദ്ദേശം: ബഫർ viRL-ന്റെ 500μl-ന് 200µl സാമ്പിൾ.അമിതമായ സാമ്പിൾ വോളിയം RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ നിരക്ക് കുറയുന്നതിന് കാരണമാകും.

7.Improper elution volume അല്ലെങ്കിൽ incomplete elution.

നിർദ്ദേശം: ശുദ്ധീകരണ നിരയുടെ എല്യൂന്റ് വോളിയം 30-50μl ആണ്;എല്യൂഷൻ പ്രഭാവം തൃപ്തികരമല്ലെങ്കിൽ, മുൻകൂട്ടി ചൂടാക്കിയ RNase-Free ddH ചേർക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു₂O കൂടാതെ 5-10മിനിറ്റ് പോലെയുള്ള ഊഷ്മാവിൽ സമയം നീട്ടുക

8. ബഫർ viRW2-ൽ കഴുകിയ ശേഷം ശുദ്ധീകരണ കോളത്തിൽ എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം ഉണ്ട്.

നിർദ്ദേശം: ബഫർ viRW2-ൽ കഴുകിയതിനു ശേഷവും 2 മിനിറ്റ് ശൂന്യ-ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷനും ശേഷവും എത്തനോൾ അവശേഷിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിൽ, ശേഷിക്കുന്ന എത്തനോൾ പൂർണ്ണമായി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ശുദ്ധീകരണ കോളം ശൂന്യ-ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷന് ശേഷം 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വയ്ക്കാം.

ശുദ്ധീകരിച്ച RNA തന്മാത്രകളുടെ അപചയം

ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ട ആർഎൻഎയുടെ ഗുണനിലവാരം സാമ്പിൾ സംഭരണം, ആർഎൻഎസിന്റെ മലിനീകരണം, പ്രവർത്തനം തുടങ്ങിയ ഘടകങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.

പൊതുവായ കാരണങ്ങളുടെ വിശകലനം:

1. ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ യഥാസമയം സംരക്ഷിച്ചില്ല.

നിർദ്ദേശം: ശേഖരിച്ചതിന് ശേഷം സമയബന്ധിതമായി സാമ്പിൾ ഉപയോഗിക്കുന്നില്ലെങ്കിൽ, ദയവായി അത് -80 ℃ അല്ലെങ്കിൽ ലിക്വിഡ് നൈട്രജനിൽ സൂക്ഷിക്കുക.ആർഎൻഎ തന്മാത്രകൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിന്, സാധ്യമാകുമ്പോഴെല്ലാം പുതുതായി ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

2. ശേഖരിച്ച സാമ്പിളുകൾ ആവർത്തിച്ച് മരവിപ്പിക്കുകയും ഉരുകുകയും ചെയ്തു.

നിർദ്ദേശം: സാമ്പിൾ ശേഖരണത്തിലും സംഭരണത്തിലും ആവർത്തിച്ചുള്ള മരവിപ്പിക്കലും ഉരുകലും (ഒന്നിലധികം തവണ പാടില്ല) ഒഴിവാക്കുക, അല്ലാത്തപക്ഷം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ വിളവ് കുറയും.

3.ഓപ്പറേഷൻ റൂമിൽ RNase അവതരിപ്പിച്ചു അല്ലെങ്കിൽ ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകൾ, മാസ്കുകൾ മുതലായവ ധരിച്ചിരുന്നില്ല.

നിർദ്ദേശം: ആർഎൻഎ തന്മാത്രകളുടെ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഒരു പ്രത്യേക ആർഎൻഎ ഓപ്പറേഷൻ റൂമിൽ മികച്ച രീതിയിൽ നടത്തുന്നു, പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് പരീക്ഷണ പട്ടിക വൃത്തിയാക്കുന്നു.RNase ആമുഖം മൂലമുണ്ടാകുന്ന RNA നശീകരണം ഒഴിവാക്കാൻ പരീക്ഷണ സമയത്ത് ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകളും മാസ്കുകളും ധരിക്കുക.

4.ഉപയോഗ സമയത്ത് RNase മുഖേന റിയാജൻറ് മലിനീകരിക്കപ്പെടുന്നു.

നിർദ്ദേശം: അനുബന്ധ പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി പുതിയ വൈറൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

5.സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, പൈപ്പറ്റ് നുറുങ്ങുകൾ മുതലായവയുടെ RNase മലിനീകരണം. നിർദ്ദേശം: സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ എന്നിവയെല്ലാം RNase-ഫ്രീ ആണെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക.

ശുദ്ധീകരിച്ച RNA തന്മാത്രകൾ താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളെ ബാധിച്ചു

റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ, നോർത്തേൺ ബ്ലോട്ട് മുതലായവ പോലുള്ള ഉപ്പ് അയോണുകളോ പ്രോട്ടീനുകളോ ഉണ്ടെങ്കിൽ, ശുദ്ധീകരണ കോളം ശുദ്ധീകരിക്കുന്ന ആർഎൻഎ തന്മാത്രകൾ താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളെ ബാധിക്കും.

1.എല്യൂട്ടഡ് ആർഎൻഎ തന്മാത്രകളിൽ ഉപ്പ് അയോണുകൾ അവശേഷിക്കുന്നു.

ശുപാർശ: ബഫർ viRW2-ൽ അൺഹൈഡ്രസ് എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്ന് ഉറപ്പുവരുത്തുക, കൂടാതെ ഓപ്പറേറ്റിംഗ് നിർദ്ദേശങ്ങളിലെ ശരിയായ സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ വേഗത അനുസരിച്ച് ശുദ്ധീകരണ കോളം രണ്ടുതവണ കഴുകുക.ഉപ്പ് അയോണുകളുടെ മലിനീകരണം പരമാവധി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തുക

2.എല്യൂട്ടഡ് ആർഎൻഎ തന്മാത്രകളിൽ ശേഷിക്കുന്ന എത്തനോൾ ഉണ്ട്

നിർദ്ദേശം: ബഫർ viRW2 ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരണ നിരകൾ കഴുകിയതായി സ്ഥിരീകരിച്ചുകഴിഞ്ഞാൽ, ഓപ്പറേറ്റിംഗ് നിർദ്ദേശങ്ങളിലെ അപകേന്ദ്ര വേഗത അനുസരിച്ച് ശൂന്യ-ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തുക.ഇനിയും എത്തനോൾ ബാക്കിയുണ്ടെങ്കിൽ, ഒരു ശൂന്യ-ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷന് ശേഷം, ശേഷിക്കുന്ന എത്തനോൾ പരമാവധി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ഊഷ്മാവിൽ 5 മിനിറ്റ് നേരം വയ്ക്കാം.

ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവലുകൾ:

വൈറൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഇൻസ്ട്രക്ഷൻ മാനുവൽ