ശുദ്ധീകരണ കോളം അടഞ്ഞുപോയിരിക്കുന്നു

ഈ കിറ്റിൽ, ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ ഓപ്പറേഷനിൽ, സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ ഘട്ടമില്ലാതെ സാമ്പിൾ എൻസൈമാറ്റിക് ലിസിസ് മിശ്രിതത്തിൽ ശുദ്ധീകരണ കോളം നേരിട്ട് ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ സാമ്പിളിന്റെ അപൂർണ്ണമായ എൻസൈമൈസേഷനും ഉയർന്ന വിസ്കോസിറ്റിയും കാരണം ശുദ്ധീകരണ കോളം തടഞ്ഞേക്കാം.

ഇനിപ്പറയുന്ന സാധ്യമായ കാരണങ്ങൾ ഇനിപ്പറയുന്നവയാണ്:

1. ടിഷ്യു സാമ്പിളുകളുടെ അപൂർണ്ണമായ എൻസൈമാറ്റിക് ദഹനം.

ശുപാർശ: ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗ് സമയം ഉചിതമായി നീട്ടാം അല്ലെങ്കിൽ 5 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 12,000 ആർപിഎമ്മിൽ (~13,400 × ഗ്രാം) സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷന് ശേഷം സൂപ്പർനാറ്റന്റ് എടുക്കാം.

2. ടിഷ്യൂ സാമ്പിളുകളുടെയോ വലിയ ടിഷ്യൂകളുടെയോ അമിതമായ ഉപയോഗം.

ശുപാർശ: സാമ്പിളിൽ 1 ബുക്കൽ സ്വാബ് കവിയാതിരിക്കുന്നതാണ് നല്ലത്;സാമ്പിൾ വളരെ വലുതാണെങ്കിൽ, ബഫർ ST1, ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ്, ബഫർ ST2 എന്നിവയുടെ അളവ് വർദ്ധിപ്പിക്കുക.

3. സാമ്പിൾ വിസ്കോസിറ്റി വളരെ കൂടുതലാണ്.

ശുപാർശ: ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിന് മുമ്പ് സാമ്പിളുകൾ 10 എംഎം ട്രിസ്-എച്ച്സിഎൽ ഉപയോഗിച്ച് ഉചിതമായി നേർപ്പിക്കാവുന്നതാണ്.

4. രക്ത കാർഡിന്റെ ശകലങ്ങൾ വലിച്ചെടുത്തു.

ശുപാർശ: ബ്ലഡ് സ്പോട്ട് (FTA കാർഡ്) ജീനോമിക് എക്‌സ്‌ട്രാക്‌ഷന്റെ ആറാം ഘട്ടത്തിന്റെ താൽക്കാലിക സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ സമയം ഉചിതമായി നീട്ടാവുന്നതാണ്.

കുറഞ്ഞ വിളവ് അല്ലെങ്കിൽ ഡിഎൻഎ ഇല്ല

സാമ്പിൾ ഉത്ഭവം, സാമ്പിൾ സ്റ്റോറേജ് അവസ്ഥകൾ, സാമ്പിൾ തയ്യാറാക്കൽ, കൃത്രിമത്വം മുതലായവ ഉൾപ്പെടെ, ജനിതക ഡിഎൻഎ വിളവെടുപ്പിനെ ബാധിക്കുന്ന വിവിധ ഘടകങ്ങളുണ്ട്.

വേർതിരിച്ചെടുക്കുമ്പോൾ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ലഭിക്കില്ല

സാധ്യമായ കാരണങ്ങൾ ഇനിപ്പറയുന്നവയാണ്:

1. സാമ്പിളുകളുടെ തെറ്റായ സംരക്ഷണം അല്ലെങ്കിൽ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിക്കുന്നത് ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ഡീഗ്രേഡേഷനിലേക്ക് നയിക്കുന്നു.

ശുപാർശ: ഓറൽ സ്വാബുകൾ പുതുതായി സാമ്പിൾ എടുക്കുന്നതാണ് നല്ലത്, കൂടാതെ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ഓപ്പറേഷനുകൾക്കായി സംരക്ഷിത സ്വാബുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് അഭികാമ്യമല്ല;ബ്ലഡ് സ്പോട്ട് സാമ്പിളുകൾ ഗുണനിലവാരം യോഗ്യമാണെന്നും സംഭരണ ​​സമയം വളരെ ദൈർഘ്യമേറിയതായിരിക്കരുതെന്നും ഉറപ്പാക്കണം.

2. വളരെ കുറച്ച് ടിഷ്യു ഉപയോഗം അനുബന്ധ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ ഇടയാക്കില്ല.

ശുപാർശ: ഓപ്പറേഷൻ ഗൈഡിലെ ബുക്കൽ സ്വാബ് സാമ്പിൾ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക, കഴിയുന്നത്ര തവണ തുടയ്ക്കുക, അങ്ങനെ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ ആവശ്യമായ കോശങ്ങൾ ഓറൽ സ്വാബിൽ ഘടിപ്പിക്കാം;ബ്ലഡ് സ്പോട്ട് സാമ്പിൾ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിന്, ബ്ലഡ് സ്പോട്ട് കട്ടിംഗ് ഏരിയ ഉചിതമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാം.

3. ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് അനുചിതമായി സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു, അതിന്റെ ഫലമായി അതിന്റെ പ്രവർത്തനം കുറയുന്നു അല്ലെങ്കിൽ നിർജ്ജീവമാകുന്നു.

ശുപാർശ: ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ സ്ഥിരീകരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതികരണത്തിനായി ഒരു പുതിയ ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

4. കിറ്റിന്റെ തെറ്റായ സംരക്ഷണം അല്ലെങ്കിൽ സംഭരണ ​​സമയം വളരെ ദൈർഘ്യമേറിയതാണ്, ഇത് കിറ്റിലെ ചില ഘടകങ്ങളുടെ പരാജയത്തിന് കാരണമാകുന്നു.

ശുപാർശ: അനുബന്ധ നടപടിക്രമങ്ങൾക്കായി ഒരു പുതിയ ബുക്കൽ സ്വാബ് ഡിഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് വാങ്ങുക.

5. ബഫർ WB കേവല എത്തനോൾ ചേർക്കുന്നില്ല.

ശുപാർശ: ബഫർ WB കേവല എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർക്കുന്നുവെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുക.

6. സിലിക്കൺ ഫിലിമിൽ എല്യൂന്റ് ശരിയായി ചേർത്തിട്ടില്ല.

ശുപാർശ: സിലിക്കൺ മെംബ്രണിന്റെ മധ്യത്തിൽ 65 °C പ്രീ-വാംഡ് എല്യൂന്റ് ഡ്രോപ്പുകൾ ചേർക്കുകയും എല്യൂഷൻ കാര്യക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വിടുകയും ചെയ്യുക.

കുറഞ്ഞ വിളവ് നൽകുന്ന ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചു

ഇനിപ്പറയുന്ന സാധ്യമായ കാരണങ്ങൾ ഇനിപ്പറയുന്നവയാണ്:

1. സാമ്പിളുകളുടെ തെറ്റായ സംരക്ഷണം അല്ലെങ്കിൽ വളരെക്കാലം സൂക്ഷിക്കുന്നത് ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ഡീഗ്രേഡേഷനിലേക്ക് നയിക്കുന്നു.

ശുപാർശ: ഓറൽ സ്വാബുകൾ പുതുതായി സാമ്പിൾ എടുക്കുന്നതാണ് അഭികാമ്യം, കൂടാതെ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ സംരക്ഷിത സ്വാബുകൾ ഉപയോഗിക്കരുത്.

2. ടിഷ്യു സാമ്പിളിന്റെ അളവ് വളരെ ചെറുതാണെങ്കിൽ, വേർതിരിച്ചെടുത്ത ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ ഉള്ളടക്കം കുറവായിരിക്കും.

ശുപാർശ: ഓപ്പറേറ്റിംഗ് ഗൈഡിലെ ഓറൽ സ്വാബ് സാമ്പിൾ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക, കഴിയുന്നത്ര തവണ തുടയ്ക്കുക, അങ്ങനെ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ ആവശ്യമായ കോശങ്ങൾ ഓറൽ സ്വാബിൽ ഘടിപ്പിക്കാം.

3. ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് അനുചിതമായി സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു, അതിന്റെ ഫലമായി അതിന്റെ പ്രവർത്തനം കുറയുന്നു അല്ലെങ്കിൽ നിർജ്ജീവമാകുന്നു.

ശുപാർശ: ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസിന്റെ സംഭരണ ​​വ്യവസ്ഥകൾ സ്ഥിരീകരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതികരണത്തിനായി ഒരു പുതിയ ഫോർജീൻ പ്രോട്ടീസ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

4. എല്യൂന്റ് പ്രശ്നങ്ങൾ.

ശുപാർശ: എല്യൂഷനു വേണ്ടി ബഫർ EB ഉപയോഗിക്കുക;ddH ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ₂O അല്ലെങ്കിൽ മറ്റ് എല്യൂന്റുകൾ, eluate ന്റെ pH 7.0-8.5 ഇടയിലാണെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുക.

5. എലുവേറ്റ് ഡ്രോപ്പ്വൈസ് ശരിയായി ചേർത്തിട്ടില്ല.

ശുപാർശ: എല്യൂഷൻ കാര്യക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് സിലിക്കൺ മെംബ്രണിന്റെ മധ്യത്തിൽ എല്യൂന്റ് ഡ്രോപ്പുകൾ ചേർക്കുകയും ഊഷ്മാവിൽ 5 മിനിറ്റ് വിടുകയും ചെയ്യുക.

6. എല്യൂഷൻ ദ്രാവകം വളരെ കുറച്ച് മാത്രമേ ശേഖരിക്കപ്പെടുകയുള്ളൂ.

ശുപാർശ: നിർദ്ദേശങ്ങളിൽ ആവശ്യാനുസരണം ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എല്യൂഷനായി എല്യൂവെന്റ് ഉപയോഗിക്കുക, കുറഞ്ഞത് 15 μl.

ജീനോമിക് ഡിഎൻഎയുടെ കുറഞ്ഞ പരിശുദ്ധി വേർതിരിച്ചിരിക്കുന്നു

താഴ്ന്ന ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ പ്യൂരിറ്റി പരാജയത്തിലേക്കോ താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളുടെ തൃപ്തികരമല്ലാത്ത ഫലങ്ങളിലേക്കോ നയിച്ചേക്കാം, ഉദാഹരണത്തിന്: എൻസൈമുകൾ തുറക്കാൻ കഴിയില്ല, പിസിആറിന് താൽപ്പര്യത്തിന്റെ ജീൻ ശകലം ലഭിക്കില്ല.

സാധ്യമായ കാരണങ്ങൾ ഇനിപ്പറയുന്നവയാണ്:

1. ഹെറ്ററോപ്രോട്ടീൻ മലിനീകരണം, ആർഎൻഎ മലിനീകരണം.

വിശകലനം: ബഫർ PW ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകിയില്ല;ബഫർ PW വാഷ് പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം ശരിയായ അപകേന്ദ്ര വേഗത ഉപയോഗിച്ച് കഴുകിയില്ല.

ശുപാർശ: എത്തനോൾ ചേർക്കുന്നതിന് മുമ്പ് സൂപ്പർനാറ്റന്റിൽ ഒരു മഴയും ഇല്ലെന്ന് ഉറപ്പാക്കുക;നിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക, ഈ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കാനാവില്ല.

2. അശുദ്ധി അയോൺ മലിനീകരണം.

വിശകലനം: ബഫർ ഡബ്ല്യുബി വാഷ് പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം ഒഴിവാക്കുകയോ ഒരു തവണ മാത്രം കഴുകുകയോ ചെയ്തു, ഇത് ശേഷിക്കുന്ന അയോണിക് മലിനീകരണത്തിന് കാരണമായി.

ശുപാർശ: ശേഷിക്കുന്ന അയോണുകൾ പരമാവധി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി ബഫർ WB 2 തവണ കഴുകുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക.

3. ആർഎൻഎ എൻസൈം മലിനീകരണം.

വിശകലനം: വിദേശ RNases ബഫറിലേക്ക് ചേർത്തു;ബഫർ പിഡബ്ല്യു വാഷ് ഓപ്പറേഷൻ തെറ്റായിരുന്നു, തൽഫലമായി RNase അവശിഷ്ടങ്ങൾ, ഇൻ വിട്രോ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പോലുള്ള ഡൗൺസ്ട്രീം RNA പരീക്ഷണ പ്രവർത്തനങ്ങളെ ബാധിക്കുന്നു.

ശുപാർശ: ഫോർജീൻ സീരീസ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഐസൊലേഷൻ കിറ്റുകൾക്ക് RNase അധികമായി ചേർക്കാതെ തന്നെ RNA നീക്കം ചെയ്യാൻ കഴിയും, അതിനാൽ buccal Swab/FTA കാർഡ് DNA ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് RNase ചേർക്കേണ്ടതില്ല;ബഫർ PW വാഷിംഗ് പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളത്തിനായുള്ള നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക, ഈ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കാനാവില്ല.

4. എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം.

വിശകലനം: ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകിയതിന് ശേഷം ബഫർ WB ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തിയില്ല.

ശുപാർശ: നിർദ്ദേശങ്ങൾക്കനുസരിച്ച് ശരിയായ ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ പ്രവർത്തനം നടത്തുക.

5. മറ്റ് അശുദ്ധി മലിനീകരണം.

വിശകലനം: സംരക്ഷിച്ച സാമ്പിളുകളോ പ്രത്യേക സാമ്പിളുകളോ മുൻകൂട്ടി ചികിത്സിച്ചിട്ടില്ല.

നിർദ്ദേശം: നിർദ്ദേശിച്ച പ്രകാരം സാമ്പിൾ നന്നായി പ്രീട്രീറ്റ് ചെയ്യുക.