പരമ്പരാഗത റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസുകൾക്ക് ഉയർന്ന ഊഷ്മാവ് സഹിക്കാൻ കഴിയില്ല (MMLV പ്രവർത്തനത്തിന് ഏറ്റവും അനുയോജ്യമായ താപനില 37-50 ° C ആണ്, AMV 42-60 ° C ആണ്).കൂടുതൽ സങ്കീർണ്ണമായ വൈറൽ ആർഎൻഎ കുറഞ്ഞ ഊഷ്മാവിൽ സിഡിഎൻഎയിലേക്ക് ഫലപ്രദമായി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രൈബ് ചെയ്യാൻ കഴിയില്ല, ഇത് കണ്ടെത്തൽ കാര്യക്ഷമത കുറയ്ക്കുന്നതിന് കാരണമാകുന്നു.പരമ്പരാഗത RT-qPCR ന് സാധാരണയായി രണ്ട് പ്രധാന എൻസൈമുകളുടെ (റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്) പങ്കാളിത്തം ആവശ്യമാണ്, ഇത് പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിന്റെ പ്രവർത്തനം ലളിതമാക്കുന്നതും ചെലവ് കുറയ്ക്കുന്നതും അസാധ്യമാക്കുന്നു.ഇവിടെ ഞങ്ങൾ രണ്ട് ഉയർന്ന താപനില-പ്രതിരോധശേഷിയുള്ള റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റസുകൾ അവതരിപ്പിക്കും, TtH, RevTaq.ഈ രണ്ട് എൻസൈമുകൾക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനവും ഉണ്ട്, അതിനാൽ അവയെ ബൈഫങ്ഷണൽ എൻസൈമുകൾ എന്ന് വിളിക്കുന്നു.

ടിടിഎച്ച് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്

തെർമസ് തെർമോഫിലസ് എച്ച്ബി8 എന്ന തെർമോഫിലിക് ബാക്ടീരിയയിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ TtH-നെ കുറിച്ച് നിങ്ങൾ കേട്ടിട്ടുണ്ടാകും.Mg2+ പോലുള്ള ഡൈവാലന്റ് കാറ്റേഷനുകളുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, ഇതിന് DNA പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനമുണ്ട്.ടാക് എൻസൈം പോലുള്ള പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങളിൽ ഇത് വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കപ്പെടുന്നു, പക്ഷേ ഇതിന് ടാക്ക് എൻസൈമിനേക്കാൾ ഉയർന്ന താപ പ്രതിരോധമുണ്ട്, അതിനാൽ ഉയർന്ന ജിസി ഉള്ളടക്ക ടെംപ്ലേറ്റുകളുള്ള പിസിആറിൽ ഇത് മികച്ച സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു.

ഈ എൻസൈമിന് അടിസ്ഥാനപരമായി 3′→5′ എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവും 5′→3′ എക്സോന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനവുമില്ല, അതിനാൽ ഇത് ഡിയോക്സി സീക്വൻസിംഗിനും ഉപയോഗിക്കാം.

ഈ എൻസൈമിന് RTase പ്രവർത്തനമുണ്ട്.Mn2+ ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, RTase പ്രവർത്തനം മെച്ചപ്പെടുത്തും.ഈ ഫീച്ചർ ഉപയോഗിച്ച്, ഒരേ ട്യൂബിൽ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ റിയാക്ഷനും PCR റിയാക്ഷനും നടത്താൻ ഇത് ഉപയോഗിക്കാം, അതായത് ഒറ്റ-ഘട്ട RT-PCR.എന്നിരുന്നാലും, Mn2+ ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിൽ, RT-PCR ന്റെ കൃത്യത ഉയർന്നതല്ല.RT പ്രവർത്തനത്തിന് rnaase H പ്രവർത്തനവുമായി യാതൊരു ബന്ധവുമില്ല.

· Tth-DNA പോളിമറേസിന്റെ വർദ്ധിച്ച പ്രവർത്തനം (pH9, ഒപ്റ്റിമം +55℃～+70℃, പരമാവധി +95℃) RNA ദ്വിതീയ ഘടന മൂലമുണ്ടാകുന്ന പ്രശ്നങ്ങളെ മറികടക്കുന്നു.Mg2+ അയോണുകളുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ ഇതേ എൻസൈം ഉപയോഗിച്ച് പിസിആർ വഴി തത്ഫലമായുണ്ടാകുന്ന cDNA വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.

ഉയർന്ന ഊഷ്മാവിൽ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനും ഡിഎൻഎ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനും നടത്താനുള്ള Tth-DNA പോളിമറേസിന്റെ കഴിവ്, സെല്ലുലാർ, വൈറൽ RNA എന്നിവയുടെ അളവ് RT-PCR, ക്ലോണിംഗ്, ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ വിശകലനം എന്നിവയ്ക്ക് ഈ എൻസൈമിനെ ഉപയോഗപ്രദമാക്കുന്നു.
1kb വരെ RNA വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ RT-PCR-ന് Tth-DNA പോളിമറേസ് ഉപയോഗിക്കുന്നു.

സവിശേഷതകളും ഗുണങ്ങളും

Tth DNA പോളിമറേസ്:

• ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ (PCR) ഉൽപ്പന്ന വലുപ്പം ഉറപ്പാക്കുക, RT-PCR പ്രതികരണത്തിൽ കുറഞ്ഞത് 1000 bp

• പരിഷ്കരിച്ച deoxyribonucleoside triphosphate ഒരു അടിവസ്ത്രമായി സ്വീകരിക്കുക

• RNase H പ്രവർത്തനവുമായി ബന്ധമില്ല

• പ്രശ്നങ്ങൾ മറികടക്കാൻ ഉയർന്ന താപ സ്ഥിരതയുണ്ട്, സാധാരണയായി ആർഎൻഎയിൽ ഉള്ള ഉയർന്ന ദ്വിതീയ ഘടനയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതാണ്

RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ്

റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ആക്റ്റിവിറ്റിയുള്ള ഒരു ചൂട്-പ്രതിരോധശേഷിയുള്ള ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്

RevTaq-RT-PCR-DNA പോളിമറേസ് ഒരു എഞ്ചിനീയറിംഗ്, ഉയർന്ന ചൂട് പ്രതിരോധം, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനങ്ങൾ എന്നിവയുള്ള ഒരു ഡ്യൂവൽ ഫംഗ്ഷണൽ എൻസൈം ആണ്.

· 95 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസിന്റെ അർദ്ധായുസ്സ് 40 മിനിറ്റിൽ കൂടുതലാണ്.

· RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ്, RNA ടെംപ്ലേറ്റിൽ നിന്ന് നേരിട്ട് ഉയർന്ന താപനിലയുള്ള റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ അനുവദിക്കുന്നു, കൂടാതെ കൂടുതൽ cDNA ടെംപ്ലേറ്റുകൾ സൃഷ്ടിക്കുന്നതിന് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘട്ടം ഒന്നിലധികം തവണ ആവർത്തിക്കാം.

· RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ് "സീറോ-സ്റ്റെപ്പ്" RT-PCR (ഐസോതെർമൽ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സ്റ്റെപ്പ് ഇല്ല) അനുവദിക്കുന്നു, കാരണം സൈക്ലിക് PCR എക്സ്റ്റൻഷൻ ഘട്ടത്തിൽ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനും ഡിഎൻഎ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനും ഒരേസമയം സംഭവിക്കുന്നു.ഇത് ഉയർന്ന ഊഷ്മാവിൽ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രതികരണത്തെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയും അതുവഴി ഉയർന്ന ഊഷ്മാവിൽ ആർഎൻഎയിലെ ശക്തമായ ദ്വിതീയ ഘടന ഉരുകുന്നതിൽ നേരിടുന്ന പ്രശ്നങ്ങൾ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

· ആപ്‌റ്റാമർ അധിഷ്‌ഠിത ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ഫോർമുല കാരണം, 57 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനു മുകളിൽ അനീലിംഗ്, എക്‌സ്‌റ്റൻഷൻ താപനില ഉയരുമ്പോൾ RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ് മികച്ച ഫലങ്ങൾ നൽകും.

· എൻസൈം ചൂട്-പ്രതിരോധശേഷിയുള്ളതിനാൽ, വളരെ ഉയർന്ന ദ്രവണാങ്കം (>60°C) ഉള്ള പ്രൈമറുകളും പ്രോബുകളും രൂപകൽപ്പന ചെയ്യാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

· പ്രതികരണ സജ്ജീകരണ പ്രക്രിയയിൽ ഒരു താപനില ഗ്രേഡിയന്റിലൂടെ അനീലിംഗ് / എക്സ്റ്റൻഷൻ ഘട്ടത്തിന്റെ താപനില ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

· ഉയർന്ന ഊഷ്മാവ്, PCR- ന്റെ ഉയർന്ന പ്രത്യേകത.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സൈക്കിൾ സാധാരണയായി പിസിആർ സൈക്കിളിനേക്കാൾ ഉയർന്ന താപനിലയിലാണ് നടത്തുന്നത്, കാരണം ഡിഎൻഎ പ്രൈമർ:ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് ഹൈബ്രിഡൈസേഷന് സാധാരണയായി ഡിഎൻഎ പ്രൈമർ:സിഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് ഡ്യൂപ്ലെക്സിനേക്കാൾ ഉയർന്ന ദ്രവണാങ്കം ഉണ്ടാകും.

· RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ് ജനിതകമായി രൂപകൽപ്പന ചെയ്തതും ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തതുമാണ്, കൂടാതെ ആംപ്ലിക്കോൺ വലുപ്പം 60-300 bp ആണ്.

RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ് കണ്ടെത്തൽ പരിധി 4 പകർപ്പുകളിൽ എത്തുന്നു/

ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത പ്രതികരണ സംവിധാനം (ഉയർന്ന ദ്രവണാങ്കത്തിന്റെ പ്രൈമറുകളുടെ സ്ഥാപനം) ചിത്രത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു.RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസ്-ഡ്രൈവ് RT-PCR, TaqPath 1-സ്റ്റെപ്പ് RT-qPCR മാസ്റ്റർ മിക്‌സിനേക്കാൾ മികച്ച സെൻസിറ്റിവിറ്റി കാണിക്കുന്നു, കൂടാതെ കുറഞ്ഞ കണ്ടെത്തൽ സാമ്പിൾ ഡൈല്യൂഷൻ ഗ്രേഡിയന്റും.

കൂടുതൽ നേട്ടങ്ങൾ:

ദ്രുത ആരംഭ പ്രവർത്തനം → പ്രാരംഭ തെർമൽ ഡീനാറ്ററേഷൻ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കാം.

ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ആപ്‌റ്റാമർ ഫോർമുല → 100% എൻസൈം പ്രവർത്തനം ഉടനടി നൽകുകയും കുറഞ്ഞ താപനിലയിൽ (<57°C) നോൺ-സ്പെസിഫിക് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ തടയുകയും ചെയ്യുക.

Cleavage function → RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഘട്ടം ഒഴിവാക്കിയിരിക്കുന്നു, കാരണം RevTaq RT-PCR DNA പോളിമറേസിന് ക്രൂഡ് റിയാക്ഷൻ സാമ്പിളുകളും പ്രോസസ്സ് ചെയ്യാൻ കഴിയും.ചൂടുള്ള RT-PCR സൈക്കിളിൽ യൂക്കറിയോട്ടുകൾ, ബാക്ടീരിയകൾ, വൈറസുകൾ എന്നിവയുടെ കോശ സ്തരങ്ങളെ പെട്ടെന്ന് നശിപ്പിക്കാൻ ഇതിന് കഴിയും.

IVD അസംസ്കൃത വസ്തുക്കളുടെ നില → ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള മാനദണ്ഡങ്ങളും അങ്ങേയറ്റം മത്സരാധിഷ്ഠിത വിലകളും