അടുത്തിടെ, ഞാൻ അതിശയകരമായ എന്തെങ്കിലും കണ്ടെത്തി!അദ്ദേഹത്തിന് ചുറ്റുമുള്ള പല നൂതന പരീക്ഷണ പ്രൊഫഷണലുകൾക്കും ചില അടിസ്ഥാന പരീക്ഷണ വിജ്ഞാന പോയിന്റുകൾ പോലും അറിയില്ല.

ഉദാഹരണത്തിന്, ഇനിപ്പറയുന്ന ചോദ്യങ്ങൾക്ക് ഉത്തരം നൽകാമോ?

OD260 ഉം A260 ഉം തമ്മിൽ വ്യത്യാസമുണ്ടോ?ഓരോന്നും എന്താണ് അർത്ഥമാക്കുന്നത്?
OD എന്നത് ഒപ്റ്റിക്കൽ ഡെൻസിറ്റിയുടെ (ഒപ്റ്റിക്കൽ ഡെൻസിറ്റി) ചുരുക്കമാണ്, A എന്നത് ആഗിരണം (ആഗിരണം) എന്നതിന്റെ ചുരുക്കെഴുത്താണ്, രണ്ട് ആശയങ്ങളും യഥാർത്ഥത്തിൽ ഒന്നുതന്നെയാണ്, "ഒപ്റ്റിക്കൽ ഡെൻസിറ്റി" എന്നത് "ആഗിരണം" ആണ്, എന്നാൽ "ഒപ്റ്റിക്കൽ ഡെൻസിറ്റി" എന്നത് മിക്ക ദേശീയ മാനദണ്ഡങ്ങൾക്കും അനുസൃതവും കൂടുതൽ നിലവാരമുള്ളതുമാണ്.

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് കോൺസൺട്രേഷൻ കണക്കാക്കാൻ സാധാരണയായി നമ്മൾ OD മൂല്യം 260nm-ൽ അളക്കുന്നു, അപ്പോൾ 1OD എന്തിനെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു?
ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന് 260nm തരംഗദൈർഘ്യത്തിൽ പരമാവധി ആഗിരണം ചെയ്യാനുള്ള കൊടുമുടിയുണ്ട്, അതിൽ DNA, RNA എന്നിവയും വിഘടിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ശകലങ്ങളും അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു (ഇതാണ് പ്രധാന പോയിന്റ്).
260 nm തരംഗദൈർഘ്യത്തിൽ അളക്കുന്ന OD മൂല്യം OD260 ആയി രേഖപ്പെടുത്തി.സാമ്പിൾ ശുദ്ധമാണെങ്കിൽ, OD260 മൂല്യത്തിന് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാമ്പിളിന്റെ സാന്ദ്രത കണക്കാക്കാം.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (ഇരട്ട-ധാരയുള്ള DNA)
=37 μg/ml ssDNA (സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎ)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ)
RT-PCR, Realtime-PCR, QPCR എന്നിവ തമ്മിൽ എന്തെങ്കിലും ബന്ധവും വ്യത്യാസവും ഉണ്ടോ?
റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ PCR എന്നതിന്റെ ചുരുക്കമാണ് RT-PCR
റിയൽ ടൈം PCR=qPCR, ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് റിയൽ ടൈം PCR എന്നതിന്റെ ചുരുക്കം
റിയൽ ടൈം പിസിആർ (റിയൽ-ടൈം ഫ്ലൂറസെന്റ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ), റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പിസിആർ (റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പിസിആർ) എന്നിവ രണ്ടും ആർടി-പിസിആർ ആയി ചുരുക്കിയതായി തോന്നുന്നു.എന്നാൽ അന്താരാഷ്ട്ര കൺവെൻഷൻ ഇതാണ്: ആർടി-പിസിആർ പ്രത്യേകമായി റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പിസിആറിനെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ജീവശാസ്ത്രത്തിൽ DNA/RNA യുടെ ദൈർഘ്യം വിവരിക്കാൻ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന nt, bp, kb ഏതൊക്കെയാണ്?
nt = ന്യൂക്ലിയോടൈഡ്
bp = അടിസ്ഥാന ജോഡി അടിസ്ഥാന ജോടി
kb = കിലോബേസ്

തീർച്ചയായും, പലരും ഈ ചെറിയ വിശദാംശങ്ങൾ ശ്രദ്ധിക്കുന്നില്ലെന്ന് നിങ്ങൾ പറയും!എല്ലാവരും ഇത് ചെയ്യുന്നു, അതെന്താണെന്ന് ആരും നിങ്ങളോട് ചോദിക്കില്ല.ഇത് അനാവശ്യമാണെന്ന് നിങ്ങൾക്കറിയാം, അല്ലേ?

ഇല്ല, ഇല്ല, ഇത് അറിയേണ്ടത് വളരെ ആവശ്യമാണ്!ഏത് കാരണം?
കാരണം നിങ്ങൾ ഒരു ലേഖനം പോസ്റ്റ് ചെയ്യാൻ ആഗ്രഹിക്കുന്നു!സഹോദരൻ!നിങ്ങൾ ബിരുദം നേടുകയോ ശാസ്ത്ര ഗവേഷണ നേട്ടങ്ങൾ പിന്തുടരുകയോ ആണെങ്കിലും, സംസാരിക്കാൻ നിങ്ങൾ ലേഖനങ്ങളെ ആശ്രയിക്കണം!

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഏറ്റവും ലളിതവും അടിസ്ഥാനപരവുമായ പരീക്ഷണമായിരിക്കണം.ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിന്റെ ഗുണനിലവാരം തുടർന്നുള്ള പരീക്ഷണങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ നേരിട്ട് നിർണ്ണയിക്കുന്നു.

പലവട്ടം പറഞ്ഞിട്ടും കാര്യമാക്കാത്ത ഒരുപാട് സുഹൃത്തുക്കൾ ഇപ്പോഴുമുണ്ട്.ഇത്തവണ ഞാൻ ലേഖനത്തിൽ നിന്ന് മാറാൻ തീരുമാനിച്ചു!

MIQE എന്നറിയപ്പെടുന്ന ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് റിയൽ-ടൈം PCR പരീക്ഷണങ്ങളുടെ പ്രസിദ്ധീകരണത്തിനുള്ള ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ വിവരങ്ങൾ, ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ പരീക്ഷണങ്ങൾ വിലയിരുത്തുന്നതിനും ലേഖനങ്ങൾ പ്രസിദ്ധീകരിക്കുന്നതിനും ആവശ്യമായ പരീക്ഷണാത്മക വിവരങ്ങൾക്ക് ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ മാനദണ്ഡങ്ങൾ നിർദ്ദേശിക്കുന്ന ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പരീക്ഷണ മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങളുടെ ഒരു കൂട്ടമാണ് അന്താരാഷ്ട്രതലത്തിൽ സമാരംഭിച്ചത്.പരീക്ഷണാത്മക സാഹചര്യങ്ങളിലൂടെയും വിശകലന രീതികളിലൂടെയും, ഗവേഷകർക്ക് ഗവേഷകന്റെ പരീക്ഷണ പദ്ധതിയുടെ സാധുത നന്നായി വിലയിരുത്താൻ കഴിയും.

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ വിഭാഗത്തിൽ, ഇനിപ്പറയുന്ന കണ്ടെത്തൽ ഇനങ്ങൾ നിർദ്ദേശിച്ചിരിക്കുന്നതായി കാണാൻ കഴിയും:

"E" എന്നത് നൽകേണ്ട വിവരങ്ങളും "D" ആവശ്യമെങ്കിൽ നൽകേണ്ട വിവരങ്ങളും സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ഫോം വളരെ സങ്കീർണ്ണമാണ്, വാസ്തവത്തിൽ, എല്ലാവരും ആരംഭിക്കേണ്ടതുണ്ടെന്ന് ഞാൻ പറയാൻ ആഗ്രഹിക്കുന്നു

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകളെ ഈ നാല് വശങ്ങളിൽ വിലയിരുത്തുന്നതിന് പരിശുദ്ധി (D), വിളവ് (D), സമഗ്രത (E), സ്ഥിരത (E).

പരീക്ഷണാത്മക ശീലങ്ങൾ അനുസരിച്ച്, ആദ്യം പരിശുദ്ധിയുടെയും ഏകാഗ്രതയുടെയും മൂല്യനിർണ്ണയ രീതികളെക്കുറിച്ച് സംസാരിക്കുക.

പരീക്ഷണക്കാർക്ക് പ്രിയപ്പെട്ടതും എളുപ്പമുള്ളതുമായ കണ്ടെത്തൽ രീതിയാണ് OD അളക്കൽ.തത്വത്തെ സംബന്ധിച്ചിടത്തോളം, ഞാൻ ഇവിടെ വിശദാംശങ്ങളിലേക്ക് പോകുന്നില്ല.ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാമ്പിളുകളുടെ അളവ് നേരിട്ട് വിശകലനം ചെയ്യാൻ പല ലബോറട്ടറികളും ഇപ്പോൾ അൾട്രാ-മൈക്രോ സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്ററുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.ആഗിരണം മൂല്യം പ്രദർശിപ്പിക്കുമ്പോൾ, പ്രോഗ്രാം നേരിട്ട് കോൺസൺട്രേഷൻ മൂല്യവും (ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ്, പ്രോട്ടീൻ, ഫ്ലൂറസെന്റ് ഡൈ) അനുബന്ധ അനുപാതങ്ങളും നൽകുന്നു.OD മൂല്യത്തിന്റെ വിശകലനത്തെ സംബന്ധിച്ചിടത്തോളം, ഈ ചിത്രം സംരക്ഷിക്കുക, നിങ്ങൾ നന്നായിരിക്കും.

യൂണിവേഴ്സൽ OD മൂല്യ പരിഹാര ലിസ്റ്റ്

എന്നിരുന്നാലും, നിങ്ങൾക്കായി പ്രത്യേകം കൊണ്ടുവരേണ്ട ചില മുന്നറിയിപ്പുകളുണ്ട്.

(എല്ലാത്തിനുമുപരി, നിങ്ങൾ പണം ലാഭിക്കുകയും നിങ്ങൾക്ക് ആവശ്യമുള്ളത് വരെ കാത്തിരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നവരായിരിക്കണമെന്ന് എനിക്കറിയാം!)

ശ്രദ്ധിക്കുക 1 ഉപകരണം

OD മൂല്യത്തെ വ്യത്യസ്ത ഉപകരണങ്ങൾ ബാധിക്കും.OD260 ഒരു നിശ്ചിത പരിധിക്കുള്ളിൽ ഉള്ളിടത്തോളം, OD230, OD280 എന്നിവയുടെ മൂല്യങ്ങൾ അർത്ഥവത്താണ്.ഉദാഹരണത്തിന്, 260nm-ൽ സാധാരണ Eppendorf D30-ന്റെ ആഗിരണം പരിധി 0~3A ആണ്, NanoDrop One of Thermo 260nm ആണ്.ആഗിരണം പരിധി 0.5~62.5A.

കുറിപ്പ് 2ഡില്യൂഷൻ റീജന്റ്

വ്യത്യസ്‌ത റിയാക്ടറുകളുടെ നേർപ്പിക്കൽ വഴി OD മൂല്യത്തെ ബാധിക്കാം.ഉദാഹരണത്തിന്, pH-ൽ ശുദ്ധീകരിച്ച RNA-യുടെ OD260/280 റീഡിംഗ്7.5 10 മി.മീ ട്രൈസ്ബഫർ 1.9-2.1 ഇടയിലാണ്, ഉള്ളപ്പോൾനിഷ്പക്ഷ ജലീയ പരിഹാരംഅനുപാതം കുറവായിരിക്കും, ഒരുപക്ഷേ 1.8-2.0 മാത്രമായിരിക്കും, എന്നാൽ ഇതിനർത്ഥം ആർഎൻഎയുടെ ഗുണമേന്മ വ്യത്യാസം മാറ്റുന്നു എന്നല്ല.

കുറിപ്പ് 3ശേഷിക്കുന്ന പദാർത്ഥങ്ങൾ

ശേഷിക്കുന്ന പദാർത്ഥങ്ങളുടെ അസ്തിത്വം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാന്ദ്രത അളക്കുന്നതിന്റെ കൃത്യതയെ ബാധിക്കും, അതിനാൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാമ്പിളുകളിൽ പ്രോട്ടീൻ, ഫിനോൾ, പോളിസാക്രറൈഡ്, പോളിഫെനോൾ എന്നിവയുടെ അവശിഷ്ടങ്ങൾ കഴിയുന്നത്ര ഒഴിവാക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്.

എന്നിരുന്നാലും, വാസ്തവത്തിൽ, ഓർഗാനിക് റിയാക്ടറുകൾ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ഒരു പഴയ രീതിയാണ്.വാണിജ്യ കിറ്റുകളിൽ, സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷനുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് സിലിക്ക അധിഷ്‌ഠിത അഡ്‌സോർപ്‌ഷൻ കോളം വഴി എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ ഇഫക്റ്റ് നേടാനാകും, നീക്കം ചെയ്യാൻ പ്രയാസമുള്ള വിഷവും ഹാനികരവുമായ ഓർഗാനിക് റിയാഗന്റുകൾ ഒഴിവാക്കുക തുടങ്ങിയവ. പ്രശ്‌നം, ഉദാഹരണത്തിന്ഫോർജീന്റെ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ കിറ്റ്, വേഗത്തിലും സുരക്ഷിതമായും പ്രവർത്തനത്തിലുടനീളം DNase/RNase, ടോക്സിക് ഓർഗാനിക് റിയാജന്റുകൾ എന്നിവ ഉപയോഗിക്കുന്നില്ല., ഒപ്പംപ്രഭാവം ആണ്നല്ലത്(കഷണ്ടിയാണെന്ന് ആകസ്മികമായി പറഞ്ഞു, പക്ഷേ നിങ്ങൾക്കറിയണമെന്ന് എനിക്കറിയാം).

ഉദാഹരണം 1: ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ വിളവും പരിശുദ്ധിയും

ഫോർജീൻ സോയിൽ ഡിഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് (DE-05511) വിവിധ സ്രോതസ്സുകളിൽ നിന്നുള്ള മണ്ണ് സാമ്പിളുകൾ കൈകാര്യം ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ ലഭിച്ച ജനിതക ഡിഎൻഎയുടെ അളവും പരിശുദ്ധിയും ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു:
ഉദാഹരണം 2: ടിഷ്യു RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ വിളവും പരിശുദ്ധിയും

അനിമൽ ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് (RE-03012) വിവിധ ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു, ലഭിച്ച ആർഎൻഎയുടെ അളവും പരിശുദ്ധിയും താഴെയുള്ള പട്ടികയിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (മൗസ് ടിഷ്യുവിനായി):
എന്നിരുന്നാലും, നിങ്ങൾ OD മൂല്യം പൂർത്തിയാക്കി എന്ന് കരുതരുത്.മുൻവശത്ത് ഞാൻ നിങ്ങൾക്കായി വരച്ച പ്രധാന പോയിന്റുകൾ നിങ്ങൾക്ക് എന്തെങ്കിലും ശ്രദ്ധയുണ്ടോ?

ശ്രദ്ധിക്കുക

വിഘടിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് തന്മാത്രകളും ആഗിരണം ചെയ്യപ്പെടുമ്പോൾ കണക്കാക്കും.നിങ്ങൾക്ക് ആർഎൻഎയിൽ ജനിതക ഡിഎൻഎ അവശിഷ്ടങ്ങൾ ഉണ്ടെന്ന് കരുതുക, നിങ്ങളുടെ ഒഡി മൂല്യം വളരെ ഉയർന്നതായി കാണപ്പെടും, എന്നാൽ ആർഎൻഎയുടെ യഥാർത്ഥ സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയില്ല.നിങ്ങളുടെ RNA ആണോ എന്നത് ഡീഗ്രേഡേഷൻ ഉണ്ടോ എന്ന് വ്യക്തമല്ല, അതിനാൽ കൂടുതൽ കൃത്യമായ ഒരു വിധി പറയാൻ ഞങ്ങൾക്ക് ഇപ്പോഴും ഒരു സമഗ്രമായ മൂല്യനിർണ്ണയ രീതി ആവശ്യമാണ്, അതായത്, MIQE-ൽ സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സമഗ്രത വിലയിരുത്തൽ.