പിസിആർ ഏറ്റവും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യയാണ്, അതിന്റെ സംവേദനക്ഷമതയും പ്രത്യേകതയും കാരണം ഇത് വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, PCR-ന് ആവർത്തിച്ചുള്ള തെർമൽ ഡിനാറ്ററേഷൻ ആവശ്യമാണ്, കൂടാതെ ക്ലിനിക്കൽ ഫീൽഡ് ടെസ്റ്റിംഗിൽ അതിന്റെ പ്രയോഗം പരിമിതപ്പെടുത്തുന്ന ഉപകരണങ്ങളും ഉപകരണങ്ങളും ആശ്രയിക്കുന്നതിന്റെ പരിമിതികളിൽ നിന്ന് മുക്തി നേടാനാവില്ല.

1990-കളുടെ തുടക്കം മുതൽ, പല ലബോറട്ടറികളും താപ ഡീനാറ്ററേഷൻ ആവശ്യമില്ലാത്ത സ്ഥിരമായ താപനില ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യ വികസിപ്പിക്കാൻ തുടങ്ങി.ഇപ്പോൾ അവർ ലൂപ്പ്-മെഡിയേറ്റഡ് ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടെക്‌നോളജി, സ്‌ട്രാൻഡ് റീപ്ലേസ്‌മെന്റ് ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടെക്‌നോളജി, റോളിംഗ് സർക്കിൾ ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ടെക്‌നോളജി, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സീക്വൻസ് ഡിപൻഡൻസ് എന്നിവ വികസിപ്പിച്ചെടുത്തിട്ടുണ്ട്.ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യയും മറ്റ് സാങ്കേതികവിദ്യകളും. 

Loop-മെഡിയേറ്റഡ് ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

ഡിഎൻഎ ഏകദേശം 65 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ചലനാത്മക സന്തുലിതാവസ്ഥയിലാണെന്ന വസ്തുതയെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ തത്വം.ഏതെങ്കിലും പ്രൈമർ ബേസ്-ജോഡിയാക്കുകയും ഇരട്ട-സ്ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയുടെ പൂരക ഭാഗത്തേക്ക് നീട്ടുകയും ചെയ്യുമ്പോൾ, മറ്റേ സ്ട്രാൻഡ് വിഘടിക്കുകയും ഒറ്റ-ധാരയായി മാറുകയും ചെയ്യും.

ഈ ഊഷ്മാവിൽ, സ്ട്രാൻഡ്-ഡിസ്പ്ലേസ്മെന്റ് ഡിഎൻഎയുടെ സമന്വയം തുടർച്ചയായി സ്വയം സർക്കുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നതിനായി ഡിഎൻഎ 4 പ്രത്യേക പ്രൈമറുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.

ആദ്യം ടാർഗെറ്റ് ജീനിലെ 6 നിർദ്ദിഷ്ട പ്രദേശങ്ങൾ F3, F2, F1, B1, B2, B3 നിർണ്ണയിക്കുക, തുടർന്ന് ഈ 6 നിർദ്ദിഷ്ട മേഖലകളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി 4 പ്രൈമറുകൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്യുക (ചുവടെയുള്ള ചിത്രത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നത് പോലെ):

ഫോർവേഡ് ഇന്നർ പ്രൈമർ (എഫ്ഐപി) F1c, F2 എന്നിവ ചേർന്നതാണ്.

ബാക്ക്‌വേർഡ് ഇന്നർ പ്രൈമർ (BIP) B1c, B2 എന്നിവ ചേർന്നതാണ്, കൂടാതെ TTTT മധ്യത്തിൽ ഒരു സ്‌പെയ്‌സറായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.

ബാഹ്യ പ്രൈമറുകൾ F3, B3 എന്നിവ യഥാക്രമം ടാർഗെറ്റ് ജീനിൽ F3, B3 മേഖലകൾ ചേർന്നതാണ്.

LAMP പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിൽ, അകത്തെ പ്രൈമറിന്റെ സാന്ദ്രത ബാഹ്യ പ്രൈമറിനേക്കാൾ പലമടങ്ങാണ്.ആന്തരിക പ്രൈമർ ആദ്യം ടെംപ്ലേറ്റ് സ്‌ട്രാൻഡുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് ഒരു ഡിഎൻഎ ഇരട്ട സ്‌ട്രാൻഡ് രൂപപ്പെടുത്തുന്നതിന് ഒരു കോംപ്ലിമെന്ററി സ്‌ട്രാൻഡ് സമന്വയിപ്പിക്കുന്നു.തുടർന്ന്, ബാഹ്യ പ്രൈമർ ടെംപ്ലേറ്റ് സ്‌ട്രാൻഡുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് ഒരു ഡിഎൻഎ ഇരട്ട സ്‌ട്രാൻഡ് ഉണ്ടാക്കുന്നു.BstDNA പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിന് കീഴിൽ, ആന്തരിക പ്രൈമർ സമന്വയിപ്പിച്ച കോംപ്ലിമെന്ററി സ്ട്രാൻഡ് പുറത്തിറങ്ങുന്നു.പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളുടെ ഒരു പരമ്പരയ്ക്ക് ശേഷം, കോംപ്ലിമെന്ററി സ്ട്രാൻഡ് ഒടുവിൽ ഒരു ഡംബെൽ ഘടനയുള്ള ഒരു ഡിഎൻഎ സ്ട്രാൻഡ് ഉണ്ടാക്കുന്നു.

ഡംബെൽ ഘടന ഡിഎൻഎ സിംഗിൾ സ്ട്രാൻഡ് തന്നെ ഒരു ഓപ്പൺ എൻഡ് ഉള്ള ഒരു ട്രാൻസിഷണൽ സ്റ്റെം-ലൂപ്പ് ഘടന ഡിഎൻഎ തുടർച്ചയായി രൂപീകരിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.ആന്തരികവും ബാഹ്യവുമായ പ്രൈമറുകൾ ട്രാൻസിഷണൽ സ്റ്റെം-ലൂപ്പ് ഘടന ഡിഎൻഎയെ തുടർച്ചയായി സ്ട്രാൻഡ് ഡിസ്‌പ്ലേസ്‌മെന്റിനും എക്സ്റ്റൻഷൻ റിയാക്‌ഷനുകൾക്കും വിധേയമാക്കുന്നു, ഒടുവിൽ വ്യത്യസ്ത നീളങ്ങളുള്ള ഒന്നിലധികം സ്റ്റെം-ലൂപ്പ് ഘടനകൾ ഉണ്ടാക്കുന്നു.ഡിഎൻഎ മിശ്രിതം.

ലൂപ്പ്-മെഡിയേറ്റഡ് ഐസോതെർമൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ ഗുണങ്ങളും ദോഷങ്ങളും

LAMP ന്റെ പ്രയോജനങ്ങൾ:

(1) ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത, 1 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ടാർഗെറ്റ് ജീനിന്റെ 1-10 പകർപ്പുകൾ ഫലപ്രദമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, കൂടാതെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത സാധാരണ PCR-ന്റെ 10-100 മടങ്ങ് ആണ്.

(2) പ്രതികരണ സമയം ചെറുതാണ്, പ്രത്യേകത ശക്തമാണ്, പ്രത്യേക ഉപകരണങ്ങൾ ആവശ്യമില്ല.

LAMP ന്റെ പോരായ്മകൾ:

(1) പ്രൈമറുകൾക്കുള്ള ആവശ്യകതകൾ പ്രത്യേകിച്ച് ഉയർന്നതാണ്.

(2) ആംപ്ലിഫൈഡ് ഉൽപ്പന്നം ക്ലോണിംഗിനും സീക്വൻസിംഗിനും ഉപയോഗിക്കാൻ കഴിയില്ല, പക്ഷേ വിധിനിർണ്ണയത്തിന് മാത്രമേ ഉപയോഗിക്കാൻ കഴിയൂ.

(3) ശക്തമായ സംവേദനക്ഷമത കാരണം, എയറോസോളുകൾ രൂപപ്പെടുത്താൻ എളുപ്പമാണ്, ഇത് തെറ്റായ പോസിറ്റീവുകൾക്ക് കാരണമാവുകയും പരിശോധനാ ഫലങ്ങളെ ബാധിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

Sട്രാൻഡ് ഡിസ്പ്ലേസ്മെന്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

1992-ൽ അമേരിക്കൻ പണ്ഡിതനായ വാക്കർ ആദ്യമായി നിർദ്ദേശിച്ച എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതികരണത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ഇൻ വിട്രോ ഐസോതെർമൽ ഡിഎൻഎ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാങ്കേതികതയാണ് സ്ട്രാൻഡ് ഡിസ്പ്ലേസ്മെന്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (എസ്ഡിഎ).

SDA-യുടെ അടിസ്ഥാന സംവിധാനത്തിൽ ഒരു നിയന്ത്രണ എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ്, സ്‌ട്രാൻഡ് ഡിസ്‌പ്ലേസ്‌മെന്റ് ആക്‌റ്റിവിറ്റിയുള്ള ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്, രണ്ട് ജോഡി പ്രൈമറുകൾ, ഡിഎൻടിപികൾ, കാൽസ്യം, മഗ്നീഷ്യം അയോണുകൾ, ബഫർ സിസ്റ്റങ്ങൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു.

സ്‌ട്രാൻഡ് ഡിസ്‌പ്ലേസ്‌മെന്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ തത്വം ടാർഗെറ്റ് ഡിഎൻഎയുടെ രണ്ടറ്റത്തും രാസപരമായി പരിഷ്‌ക്കരിച്ച നിയന്ത്രണ എൻഡോ ന്യൂക്ലീസ് തിരിച്ചറിയൽ ക്രമത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്.എൻഡോന്യൂക്ലീസ് അതിന്റെ തിരിച്ചറിയൽ സൈറ്റിൽ സ്ട്രാൻഡ് ഡിഎൻഎയിലെ വിടവ് തുറക്കുന്നു, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് വിടവ് 3′ എൻഡ് നീട്ടുകയും അടുത്ത ഡിഎൻഎ സ്ട്രാൻഡ് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

മാറ്റിസ്ഥാപിച്ച ഡിഎൻഎയുടെ ഒറ്റ സരണികൾ പ്രൈമറുകളുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ഉപയോഗിച്ച് ഇരട്ട സ്ട്രോണ്ടുകളായി നീട്ടാം.ഈ പ്രക്രിയ തുടർച്ചയായി ആവർത്തിക്കുന്നു, അതിനാൽ ലക്ഷ്യ ശ്രേണി കാര്യക്ഷമമായി വർദ്ധിപ്പിക്കും.

സ്ട്രാൻഡ് ഡിസ്പ്ലേസ്മെന്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ ഗുണങ്ങളും ദോഷങ്ങളും

SDA യുടെ പ്രയോജനങ്ങൾ:

ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത കൂടുതലാണ്, പ്രതികരണ സമയം ചെറുതാണ്, പ്രത്യേകത ശക്തമാണ്, പ്രത്യേക ഉപകരണങ്ങളൊന്നും ആവശ്യമില്ല.

എസ്ഡിഎയുടെ പോരായ്മകൾ:

ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ ഏകീകൃതമല്ല, ചില സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ്, ഡബിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ എല്ലായ്പ്പോഴും എസ്ഡിഎ സൈക്കിളിൽ ഉൽപ്പാദിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് കണ്ടെത്തുമ്പോൾ ടെയ്ലിംഗ് അനിവാര്യമായും സംഭവിക്കും.

Rഓളിംഗ് സർക്കിൾ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

റോളിംഗ് സർക്കിൾ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (ആർ‌സി‌എ) നിർദ്ദേശിക്കുന്നത് റോളിംഗ് സർക്കിൾ വഴി രോഗകാരികളായ ജീവികളിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎ പകർത്തുന്ന രീതിയാണ്.ഒരു സ്ഥിരമായ ഊഷ്മാവിൽ ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി സിംഗിൾ-സ്ട്രാൻഡഡ് വൃത്താകൃതിയിലുള്ള ഡിഎൻഎ ഉപയോഗിക്കുന്നതിനെയും ടാർഗെറ്റ് ജീനിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ നേടുന്നതിന് റോളിംഗ് സർക്കിൾ ഡിഎൻഎ സിന്തസിസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിന് കീഴിൽ ഒരു പ്രത്യേക ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് (Phi29 പോലുള്ളവ) ഉപയോഗിക്കുന്നതിനെയും ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ആർസിഎയെ ലീനിയർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ, എക്‌സ്‌പോണൻഷ്യൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എന്നിങ്ങനെ വിഭജിക്കാം.ലീനിയർ ആർസിഎയുടെ കാര്യക്ഷമത 10 ൽ എത്താം⁵സമയങ്ങൾ, കൂടാതെ എക്‌സ്‌പോണൻഷ്യൽ RCA യുടെ കാര്യക്ഷമത 10 ൽ എത്താം⁹തവണ.

ചുവടെയുള്ള ചിത്രത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ ലളിതമായ വ്യത്യാസം, ലീനിയർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ a 1 പ്രൈമർ മാത്രമേ ഉപയോഗിക്കുന്നുള്ളൂ, എക്‌സ്‌പോണൻഷ്യൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ b ന് 2 പ്രൈമറുകൾ ഉണ്ട്.

ലീനിയർ ആർസിഎയെ സിംഗിൾ പ്രൈമർ ആർസിഎ എന്നും വിളിക്കുന്നു.ഒരു പ്രൈമർ വൃത്താകൃതിയിലുള്ള ഡിഎൻഎയുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്താൽ വിപുലീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.ഒരു ലൂപ്പിന്റെ ദൈർഘ്യത്തിന്റെ ആയിരക്കണക്കിന് മടങ്ങ് ആവർത്തന ശ്രേണികളുള്ള ഒരു ലീനിയർ സിംഗിൾ സ്‌ട്രാൻഡാണ് ഉൽപ്പന്നം.

ലീനിയർ ആർ‌സി‌എയുടെ ഉൽപ്പന്നം എല്ലായ്പ്പോഴും ആരംഭ പ്രൈമറുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നതിനാൽ, സിഗ്നലിന്റെ എളുപ്പത്തിലുള്ള ഫിക്സേഷൻ ഒരു പ്രധാന നേട്ടമാണ്.

എക്സ്പോണൻഷ്യൽ ആർസിഎ, ഹൈപ്പർ ബ്രാഞ്ച് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ എച്ച്ആർസിഎ (ഹൈപ്പർ ബ്രാഞ്ച്ഡ് ആർസിഎ) എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു, എക്സ്പോണൻഷ്യൽ ആർസിഎയിൽ, ഒരു പ്രൈമർ ആർസിഎ ഉൽപ്പന്നത്തെ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു, രണ്ടാമത്തെ പ്രൈമർ ആർസിഎ ഉൽപ്പന്നവുമായി ഹൈബ്രിഡൈസ് ചെയ്യുകയും വിപുലീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, കൂടാതെ മാറ്റിസ്ഥാപിക്കൽ ഇതിനകം തന്നെ ആർസിഎ ഉൽപ്പന്നവുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.

റോളിംഗ് സർക്കിൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ ഗുണങ്ങളും ദോഷങ്ങളും

RCA യുടെ പ്രയോജനങ്ങൾ:

ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമത, നല്ല പ്രത്യേകത, എളുപ്പമുള്ള പ്രവർത്തനം.

ആർസിഎയുടെ പോരായ്മകൾ:

സിഗ്നൽ കണ്ടെത്തൽ സമയത്ത് പശ്ചാത്തല പ്രശ്നങ്ങൾ.RCA പ്രതികരണ സമയത്ത്, സർക്കുലേറ്റ് ചെയ്യാത്ത പാഡ്‌ലോക്ക് പ്രോബും അൺബൗണ്ട് പ്രോബിന്റെ ടെംപ്ലേറ്റ് DNA അല്ലെങ്കിൽ RNA ചില പശ്ചാത്തല സിഗ്നലുകൾ സൃഷ്ടിച്ചേക്കാം. 

Nയൂക്ലികാസിഡ് സീക്വൻസ് അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സീക്വൻസ്-ബേസ്ഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (NASBA) PCR-ന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത ഒരു പുതിയ സാങ്കേതികവിദ്യയാണ്.T7 പ്രൊമോട്ടർ സീക്വൻസുള്ള ഒരു ജോടി പ്രൈമറുകളാൽ നയിക്കപ്പെടുന്ന തുടർച്ചയായതും ഐസോതെർമൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷനുമാണ് ഇത്.സാങ്കേതികവിദ്യയ്ക്ക് 2 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ ടെംപ്ലേറ്റ് ആർഎൻഎയെ ഏകദേശം 109 മടങ്ങ് വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, ഇത് പരമ്പരാഗത പിസിആർ രീതിയേക്കാൾ 1000 മടങ്ങ് കൂടുതലാണ്, പ്രത്യേക ഉപകരണങ്ങൾ ആവശ്യമില്ല.

രോഗം പ്രത്യക്ഷപ്പെട്ട ഉടൻ തന്നെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള രോഗനിർണയത്തിനായി ഈ സാങ്കേതികവിദ്യ ഉപയോഗിച്ചു, കൂടാതെ പല കമ്പനികളും നിലവിൽ ആർഎൻഎ കണ്ടെത്തൽ കിറ്റുകളിൽ ഈ രീതി ഉപയോഗിക്കുന്നു.

ആർഎൻഎ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയും ഉപയോഗിക്കാമെങ്കിലും, നാസ്ബയ്ക്ക് അതിന്റേതായ ഗുണങ്ങളുണ്ട്: താരതമ്യേന സ്ഥിരമായ താപനില സാഹചര്യങ്ങളിൽ ഇത് നടപ്പിലാക്കാൻ കഴിയും, കൂടാതെ ഇത് പരമ്പരാഗത പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയേക്കാൾ സ്ഥിരവും കൃത്യവുമാണ്.

പ്രതികരണം 41 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലാണ്, ഇതിന് AMV (ഏവിയൻ മൈലോബ്ലാസ്റ്റോസിസ് വൈറസ്) റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, RNase H, T7 RNA പോളിമറേസ്, ഒരു ജോടി പ്രൈമറുകൾ എന്നിവ ആവശ്യമാണ്.

പ്രക്രിയയിൽ പ്രധാനമായും ഉൾപ്പെടുന്നു:

ഫോർവേഡ് പ്രൈമറിൽ T7 പ്രൊമോട്ടറിന്റെ കോംപ്ലിമെന്ററി സീക്വൻസ് അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.പ്രതികരണ സമയത്ത്, ഫോർവേഡ് പ്രൈമർ ആർഎൻഎ സ്ട്രാൻഡുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുകയും എഎംവി എൻസൈം ഉത്തേജിപ്പിക്കുകയും ഡിഎൻഎ-ആർഎൻഎ ഇരട്ട സ്ട്രാൻഡ് രൂപപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു.

RNase H ഹൈബ്രിഡ് ഡബിൾ സ്‌ട്രാൻഡിലെ ആർഎൻഎയെ ദഹിപ്പിക്കുകയും സിംഗിൾ സ്‌ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎ നിലനിർത്തുകയും ചെയ്യുന്നു.

റിവേഴ്‌സ് പ്രൈമറിന്റെയും എഎംവി എൻസൈമിന്റെയും പ്രവർത്തനത്തിൽ, ടി7 പ്രൊമോട്ടർ സീക്വൻസ് അടങ്ങിയ ഒരു ഡിഎൻഎ ഇരട്ട സ്‌ട്രാൻഡ് രൂപപ്പെടുന്നു.

T7 RNA പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിന് കീഴിൽ, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രക്രിയ പൂർത്തിയാകുകയും വലിയ അളവിൽ ടാർഗെറ്റ് RNA നിർമ്മിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

NASBA യുടെ പ്രയോജനങ്ങൾ:

(1) ഇതിന്റെ പ്രൈമറിന് T7 പ്രൊമോട്ടർ സീക്വൻസുണ്ട്, എന്നാൽ വിദേശ ഡബിൾ സ്‌ട്രാൻഡഡ് ഡിഎൻഎയ്‌ക്ക് T7 പ്രൊമോട്ടർ സീക്വൻസ് ഇല്ല, അത് വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയില്ല, അതിനാൽ ഈ സാങ്കേതികവിദ്യയ്ക്ക് ഉയർന്ന പ്രത്യേകതയും സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും ഉണ്ട്.

(2) NASBA നേരിട്ട് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രക്രിയയെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ റിയാക്ഷനിൽ ഉൾപ്പെടുത്തി, പ്രതികരണ സമയം കുറയ്ക്കുന്നു.

NASBA യുടെ പോരായ്മകൾ:

(1) പ്രതികരണ ഘടകങ്ങൾ കൂടുതൽ സങ്കീർണ്ണമാണ്.

(2) പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന്റെ വില കൂടാൻ മൂന്ന് തരം എൻസൈമുകൾ ആവശ്യമാണ്.