നിങ്ങൾക്ക് എത്രത്തോളം അറിയാം

കുറിച്ച് എൻയൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ

ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ തുടക്കവും അവസാനവും

തുടക്കത്തിൽ എല്ലാം ബുദ്ധിമുട്ടാണ്, ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡാണ് ഏറ്റവും കൂടുതൽ

തന്മാത്രാ പരീക്ഷണങ്ങളുടെ തുടക്കം, തുടർന്നുള്ള പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി

വിജയമോ പരാജയമോ നിർണായക സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു.

ട്രെയ്സ്/അൾട്രാ-ട്രേസ് യുവി സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ പല ശാസ്ത്ര ഗവേഷകരും ഇഷ്ടപ്പെടുന്നു, കാരണം ഇതിന് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാന്ദ്രതയും പ്രോട്ടീൻ, ഉപ്പ് അയോൺ അവശിഷ്ടങ്ങൾ എന്നിവ ലളിതമായും വേഗത്തിലും സാമ്പത്തികമായും കണ്ടെത്താൻ കഴിയും.

നമുക്കെല്ലാവർക്കും അറിയാവുന്നതുപോലെ, A260 എന്നാൽ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ആഗിരണം OD മൂല്യം, A280 എന്നാൽ പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത ആഗിരണം OD മൂല്യം, A230 എന്നാൽ ഉപ്പ് അയോൺ കോൺസൺട്രേഷൻ ആഗിരണം OD മൂല്യം, അതിനാൽ A260 ന് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് കോൺസൺട്രേഷൻ പരിവർത്തനം ചെയ്യാൻ കഴിയും, A260/280 എന്നാൽ പ്രോട്ടീൻ അവശിഷ്ടം, A260/230 എന്നതിനർത്ഥം, ഗവേഷണത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിലുള്ള അളവ്, ഗവേഷണത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനം. അത് "പരമ്പരാഗത"ഡിഎൻഎയുടെയും ആർഎൻഎയുടെയും പരിശുദ്ധി വിശദീകരിക്കാൻ ഇതിന് കഴിയുമെന്ന് വിശ്വസിക്കാൻഒരു പരിധി വരെ.ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വിളവും പരിശുദ്ധിയും തിരിച്ചറിയുന്നതിനുള്ള ഒരേയൊരു മാനദണ്ഡമല്ല ഇത്, ഇത് ഒരു റഫറൻസായി മാത്രമാണ് ഉപയോഗിക്കുന്നത്, മാത്രമല്ല ഇത് ഒരു "സ്വർണ്ണ നിലവാരം" അല്ല.

തെർമോ ഫിഷർ ND-2000 മാനുവൽ പരിശോധനാ ഫലങ്ങളുടെ വിശ്വാസ്യതയെ ഊന്നിപ്പറയുന്നു

കാരണം, മൈക്രോ/അൾട്രാമൈക്രോ യുവി സ്പെക്‌ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിച്ചുള്ള ഫലങ്ങൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ വിളവും പരിശുദ്ധിയും മാത്രമേ പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നുള്ളൂ, കൂടാതെ സ്വാധീനിക്കുന്ന നിരവധി ഘടകങ്ങളുണ്ട് (ഒപ്റ്റിക്കൽ പാത്ത്, സാമ്പിൾ വോളിയം, സാമ്പിൾ കോൺസൺട്രേഷൻ, പിഎച്ച് മൂല്യം, ആഗിരണം അളക്കുന്നതിനെ ബാധിക്കുന്ന മറ്റ് അയോണുകൾ മുതലായവ) , അളന്ന OD മൂല്യം ആവശ്യമായി വരില്ല.അതേ സമയം, ആഗിരണം മൂല്യനിർണ്ണയ സാമഗ്രികളുടെ പ്രത്യേകതയുടെ അഭാവം മൂലം, ഒറ്റ-ധാരയുള്ള DNA, ഇരട്ട-ധാരയുള്ള DNA, RNA, dNTP-കൾ, ചില പ്രോട്ടീനുകൾ എന്നിവയ്‌ക്കെല്ലാം 260nm തരംഗദൈർഘ്യത്തിൽ ആഗിരണം ചെയ്യാനുള്ള കൊടുമുടിയുണ്ട്, മാത്രമല്ല A260 മാത്രം നിർണ്ണയിക്കുന്ന സാന്ദ്രത യഥാർത്ഥ DNA അല്ലെങ്കിൽ RNA ആയിരിക്കണമെന്നില്ല.ഏകാഗ്രതയും അതിന്റെ സമഗ്രതയും അധഃപതനവും വിലയിരുത്താനാവില്ല.

നമ്മുടെ ശുദ്ധീകരിച്ച ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ ഗുണനിലവാരം എങ്ങനെ വിലയിരുത്താം?കണ്ടുപിടിക്കാൻ മൈക്രോ/അൾട്രാമൈക്രോ യുവി സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ ഉപയോഗിക്കുന്നതിനു പുറമേ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ ശുദ്ധതയും സമഗ്രതയും ദൃശ്യപരമായി പ്രദർശിപ്പിക്കാനും ഒരു പരിധിവരെ ഏകാഗ്രത സൂചിപ്പിക്കാനും അഗറോസ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് പോലുള്ള രീതികളും ആവശ്യമാണ്.ഈ രീതിയിൽ, വിവിധ രീതികളുടെ കണ്ടെത്തൽ ഫലങ്ങളിൽ നിന്ന് ലഭിക്കുന്ന ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വിളവും പരിശുദ്ധിയും വിശ്വസനീയമാണ്.

പരീക്ഷണ ചാർട്ട് താരതമ്യം

കമ്പനി എയുടെ ഡിഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റുകൾ ഉപയോഗിച്ച് H1299 സെല്ലുകളുടെ ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌റ്റുചെയ്‌തു, കൂടാതെ കാര്യമായ അശുദ്ധി മലിനീകരണം കാണപ്പെട്ടു, ഇത് ഉയർന്ന OD മൂല്യങ്ങൾക്ക് കാരണമായി.

(OD അളക്കൽ മൂല്യവും അനുബന്ധ ഇലക്ട്രോഫെറോഗ്രാമും)

മൂല്യനിർണ്ണയ സൂചിക

ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വിളവിനും ഗുണനിലവാര പരിശോധനയ്ക്കും ഒരു "സ്വർണ്ണ നിലവാരം" ഉണ്ടോ?

നമുക്കറിയാവുന്നിടത്തോളം, ലളിതവും വേഗതയേറിയതും വിലകുറഞ്ഞതുമായ രീതികളൊന്നുമില്ല.അത് സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമീറ്റർ, ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് അല്ലെങ്കിൽ മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി എന്നിവയാണെങ്കിലും, അവയെല്ലാം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ സാന്ദ്രതയും പരിശുദ്ധിയും വിവിധ വശങ്ങളിൽ നിന്ന് പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു, അവ പരസ്പരം പരാമർശിച്ചുകൊണ്ട് വിലയിരുത്തേണ്ടതുണ്ട്.

മികച്ച മൂല്യനിർണ്ണയ സൂചിക എപ്പോഴുംഫോളോ-അപ്പ് പരീക്ഷണാത്മക ആപ്ലിക്കേഷൻ.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെയും പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെയും കാര്യക്ഷമതയെ ഇത് ബാധിക്കില്ല.വിശ്വസനീയമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ഉൽപ്പന്നങ്ങളും Ct മൂല്യങ്ങളും നേടുകയും സീക്വൻസിംഗിലൂടെ പൂർണ്ണമായ ഒരു ശ്രേണി നേടുകയും ചെയ്യുന്നത് വിജയകരമായ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിച്ചെടുക്കലാണ്.

ചുരുക്കത്തിൽ, "നല്ല ഡൗൺസ്ട്രീം പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾ നല്ല എക്സ്ട്രാക്ഷൻ പാരാമീറ്ററുകളായി ഉപയോഗിക്കുന്നത്" എന്ന വീക്ഷണത്താൽ അനുപാതം മാത്രമുള്ള സിദ്ധാന്തത്തിന്റെ വീക്ഷണത്തെ വെല്ലുവിളിക്കണം!

ഉയർന്ന ഡിഎൻഎ/ആർഎൻഎ പരിശുദ്ധി ലഭിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന ഫോർജീൻ ഡിഎൻഎ ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റുകൾ:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/