ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈം വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.സാധാരണ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈമിന് ചില നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷനും പ്രൈമർ ഡൈമറുകളുടെ രൂപീകരണവും ഫലപ്രദമായി ഒഴിവാക്കാനും ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ വിജയ നിരക്ക് ഫലപ്രദമായി മെച്ചപ്പെടുത്താനും കഴിയും.പ്രത്യേകിച്ചും ജനിതക പരിശോധനാ മേഖലയിൽ, ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈം വ്യവസായത്തിൽ നിർബന്ധിത മാനദണ്ഡമായി തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട്, സാധാരണ ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ് ഉപയോഗിക്കരുത്.മുകളിൽ നിന്ന് കാണാൻ കഴിയുന്നതുപോലെ, ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈമുകൾ വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.നിലവിൽ, ആഭ്യന്തര വിപണിയിൽ ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈമുകളുടെ നിരവധി ബ്രാൻഡുകൾ ഉണ്ട്, എന്നാൽ ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള നിരവധി ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈമുകൾ ഇല്ല.നിരവധി ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക് എൻസൈം ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ അഭിമുഖീകരിക്കുമ്പോൾ, നമ്മൾ എങ്ങനെ തിരഞ്ഞെടുക്കണം?

1. ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയുള്ള ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈം തിരഞ്ഞെടുക്കുക

പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത ടാക് എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനവുമായി അടുത്ത ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.ഒരു നല്ല Taq എൻസൈം പ്രതികരണ സംവിധാനം ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത ശേഷം, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത 95% ന് മുകളിലാണ്, കൂടാതെ പ്രാരംഭ ടെംപ്ലേറ്റ് തുകയുടെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ശ്രേണി വിശാലമാണ്.ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ഉള്ളടക്കം കുറവായിരിക്കുമ്പോൾ തൃപ്തികരമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ലഭിക്കും, കൂടാതെ ടെംപ്ലേറ്റ് തുക ഉയർന്നതും എക്‌സ്‌പോണൻഷ്യൽ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാലയളവ് ദൈർഘ്യമേറിയതും ആയപ്പോൾ വിഷം കഴിക്കുന്നത് എളുപ്പമല്ല.മോശം പ്രകടനമുള്ള ടാക്ക് എൻസൈമിന്, പ്രതികരണ സംവിധാനം നിരവധി തവണ ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തിട്ടുണ്ടെങ്കിലും, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമത ഇപ്പോഴും 90% ൽ താഴെയാണ്, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവിന്റെ "എസ്" ആകൃതി വ്യക്തമല്ല, ചരിവ് ചെറുതാണ്, വക്രം പരന്നതാണ്.ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ അളവ് കുറവാണെങ്കിൽ, അത് വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയില്ല, കൂടാതെ ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ അളവ് കൂടുതലാണെങ്കിൽ, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രഭാവം അനുയോജ്യമല്ല.അതിനാൽ, ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയുള്ള ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുകളുടെ തിരഞ്ഞെടുപ്പ് PCR, qPCR എന്നിവയുടെ വിജയത്തിന് നിർണായകമാണ്.

2. ശക്തമായ എൻസൈം ശക്തിയുള്ള ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈം തിരഞ്ഞെടുക്കുക

ടാക്ക് എൻസൈമിന്റെ എൻസൈമാറ്റിക് ശക്തി ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.സാധാരണയായി, ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈമിന്റെ എൻസൈമാറ്റിക് ശക്തി ശക്തമാകുമ്പോൾ, പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ എക്‌സ്‌പോണൻഷ്യൽ വളർച്ചാ കാലയളവ്, കൂടുതൽ സാധാരണമായ 'എസ്-ആകൃതിയിലുള്ള' വക്രം, ഉയർന്ന ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ മൂല്യം, മൾട്ടിപ്ലക്‌സ് പിസിആർ കണ്ടെത്തലിന് കൂടുതൽ അനുയോജ്യം.ദുർബലമായ എൻസൈമാറ്റിക് ശക്തിയുള്ള ബ്രാൻഡ് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസുകൾക്ക് സാധാരണയായി 2-പ്ലെക്സ് പ്രതികരണങ്ങളെ മാത്രമേ പിന്തുണയ്ക്കാൻ കഴിയൂ.3-പ്ലെക്സ് പ്രതികരണങ്ങൾ ചെയ്യുമ്പോൾ, ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് കുറവാണ്, ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ മൂല്യം കുറവാണ്, സാധാരണ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഇല്ല, അതിനാൽ ഫലങ്ങൾ വിലയിരുത്താൻ പ്രയാസമാണ്.

3. ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമതയുള്ള ഒരു ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക് എൻസൈം തിരഞ്ഞെടുക്കുക

പൊതുവായി പറഞ്ഞാൽ, ഡിഎൻഎ പോളിമറേസിന് ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയും ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമതയും ഉണ്ട്, എന്നാൽ പൊരുത്തക്കേടുകളും ഉണ്ട്.വർദ്ധിപ്പിക്കേണ്ട സാമ്പിളിന്റെ ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ബാഹുല്യം കുറവാണെങ്കിൽ, ടാക് എൻസൈമിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി പരിശോധിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.ടാർഗെറ്റ് ജീൻ പ്ലാസ്മിഡ് ശകലത്തിന്റെ 10-മടങ്ങ് അല്ലെങ്കിൽ 5-മടങ്ങ് ഗ്രേഡിയന്റ് നേർപ്പിക്കുക, താഴ്ന്ന നേർപ്പിക്കലിൽ PCR കണ്ടെത്തൽ നടത്തുക, ഉയർന്ന ഡിറ്റക്ഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റിയുള്ള ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക്ക് എൻസൈം തിരഞ്ഞെടുക്കുക എന്നിവയാണ് ഏറ്റവും സാധാരണമായ കണ്ടെത്തൽ രീതി.

ഗവേഷകർ അവരുടെ സ്വന്തം പരീക്ഷണ ആവശ്യങ്ങൾക്കും ഫണ്ടിംഗ് വ്യവസ്ഥകൾക്കും അനുസരിച്ച് തിരഞ്ഞെടുക്കേണ്ടതുണ്ടെന്ന് മുകളിൽ പറഞ്ഞവയിൽ നിന്ന് കാണാൻ കഴിയും.ഹോട്ട്-സ്റ്റാർട്ട് ടാക് എൻസൈമിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയും സംവേദനക്ഷമതയും കണ്ടെത്തുന്നതിന് ഗ്രേഡിയന്റ് ഡൈല്യൂഷൻ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പരീക്ഷണം നടത്തുന്നത് നല്ലതാണ്.

ഫോർജീനിന്റെ ഒരു ഉദാഹരണം's Taq DNA പോളിമറേസ്:

ഫോറെസി എച്ച്എസ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്

വിവരണം

ജീൻ റീകോമ്പിനേഷൻ ടെക്നോളജി ഉപയോഗിച്ച് എസ്ഷെറിച്ചിയ കോളി എഞ്ചിനീയറിംഗ് ബാക്ടീരിയയിൽ പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന ഒരു ഡിഎൻഎ പോളിമറേസാണ് ഫോറേസി എച്ച്എസ് ടാക്ക് ഡിഎൻഎ പോളിമറേസ്.എൻസൈം ഒരു അദ്വിതീയ പ്രതികരണ ബഫറുമായി സംയോജിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു, ഇത് ഉൽപ്പന്നത്തെ ഉയർന്ന പ്രതിരോധശേഷിയുള്ളതും അനുയോജ്യവുമാക്കുന്നു, കൂടാതെ സാമ്പിൾ ലൈസേറ്റ് (ഫോറെജീൻ ലൈസിസ് സിസ്റ്റം) നേരിട്ട് കണ്ടെത്തൽ പ്രതികരണങ്ങൾക്കുള്ള ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിക്കാം.

അപേക്ഷ

ശുദ്ധീകരിച്ച ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെയും ശുദ്ധീകരിക്കാത്ത ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെയും ഗുണപരമായ PCR, ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR കണ്ടെത്തൽ.

ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം

1. എക്സോജനസ് ന്യൂക്ലീസ് പ്രവർത്തനങ്ങളൊന്നും കണ്ടെത്തിയില്ല

2. ഹോസ്റ്റ് ഇല്ലാതെ ശേഷിക്കുന്ന ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ കണ്ടെത്താനുള്ള PCR രീതി

3. ഇതിന് മനുഷ്യ ജീനോമിലെ ഒറ്റ-പകർപ്പ് ജീനുകളെ ഫലപ്രദമായി വർദ്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും

4.ആഴ്ച ഊഷ്മാവിൽ സൂക്ഷിക്കുക,വ്യക്തമല്ലാത്ത പ്രവർത്തന മാറ്റങ്ങൾ

ഉൽപ്പന്ന വിശദാംശങ്ങൾ: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/