പിസിആറിന്റെ ജനനം
PCR (പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ)
പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ കണ്ടുപിടിച്ചിട്ട് 30 വർഷത്തിലേറെയായി.30 വർഷത്തിലേറെയായി, ലോകമെമ്പാടുമുള്ള നിരവധി പണ്ഡിതന്മാർ സപ്ലിമെന്റും മെച്ചപ്പെടുത്തലും തുടരുന്നതിന് ശേഷം, PCR സാങ്കേതികവിദ്യ മുഴുവൻ ലൈഫ് സയൻസസ് മേഖലയിലും ഏറ്റവും വ്യാപകവും പതിവായി ഉപയോഗിക്കുന്നതും ഏറ്റവും പ്രധാനപ്പെട്ടതുമായ അടിസ്ഥാന ഗവേഷണ രീതിയായി മാറി.
പരമ്പരാഗത PCR സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ വ്യാപകമായ പ്രയോഗത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR തുടങ്ങിയവയും പുതുതായി ഉയർന്നുവന്ന ഡിജിറ്റൽ PCR (ഡിജിറ്റൽ PCR) എന്നിവയും ഭൂരിഭാഗം ശാസ്ത്ര ഗവേഷകരുടെയും ഗവേഷണ രീതികളെ വളരെയധികം സമ്പുഷ്ടമാക്കി.
പരമ്പരാഗത പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ തകരാറുകൾ
സങ്കീർണ്ണമായ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർപിരിയലുംവേർതിരിച്ചെടുക്കൽ:
★ പരമ്പരാഗത PCR സാങ്കേതികവിദ്യ: ആവശ്യമാണ്
★ പിസിആർ ഉരുത്തിരിഞ്ഞ സാങ്കേതികവിദ്യ: ആവശ്യമാണ്
★ DNA, RNA സാമ്പിളുകൾ: വലിയ വ്യത്യാസങ്ങൾ, ബുദ്ധിമുട്ടുള്ള പ്രവർത്തന ആവശ്യകതകൾ
★ ശരീര അപകടങ്ങൾ: വിഷ പദാർത്ഥങ്ങൾ ശരീരത്തെ ദോഷകരമായി ബാധിക്കുന്നു
പരമ്പരാഗത പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയ്ക്കും ഡെറിവേറ്റീവ് സാങ്കേതികവിദ്യയ്ക്കും ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് വേർതിരിക്കലും ശുദ്ധീകരണവും ആവശ്യമാണ്.
പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ ആവശ്യകതകൾ നിറവേറ്റുന്ന ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സാമ്പിളുകൾ ലഭിക്കുന്നതിന് ഏതൊരു ബയോളജിക്കൽ സാമ്പിളും സങ്കീർണ്ണവും മടുപ്പിക്കുന്നതുമായ സാമ്പിൾ പ്രോസസ്സിംഗിലൂടെ കടന്നുപോകേണ്ടതുണ്ട്.
ഡിഎൻഎയുടെയും ആർഎൻഎയുടെയും വേർതിരിക്കലും വേർതിരിച്ചെടുക്കലും എല്ലായ്പ്പോഴും പ്രസക്തമായ ശാസ്ത്ര ഗവേഷകർ എല്ലാ ദിവസവും ആവർത്തിക്കേണ്ട ഒരു അടിസ്ഥാന ദൗത്യമാണ്.
സാമ്പിളുകൾ തമ്മിലുള്ള വലിയ വ്യത്യാസങ്ങൾ കാരണം, ഡിഎൻഎയുടെയും ആർഎൻഎയുടെയും വേർപിരിയൽ, വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയകളും വളരെ വ്യത്യസ്തമാണ്.ഈ ജോലിക്ക് ഓപ്പറേറ്റർമാർക്ക് ഉയർന്ന സാങ്കേതിക വൈദഗ്ദ്ധ്യം ആവശ്യമാണ്.പരമ്പരാഗത വേർതിരിക്കൽ, വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ സാങ്കേതികതകൾക്ക് ചില ഉയർന്ന വിഷ രാസ ഘടകങ്ങളുമായി ദീർഘകാല ബന്ധം ആവശ്യമാണ്.ഇത് ഓപ്പറേറ്ററുടെ ശരീരത്തിന് മാറ്റാനാവാത്ത കേടുപാടുകൾ വരുത്തുകയും പരീക്ഷണ സമയത്ത് നേരിട്ട് കേടുപാടുകൾ വരുത്തുകയും ചെയ്യും.
അതേ സമയം, പഠിക്കാൻ ധാരാളം സാമ്പിളുകൾ ഉള്ളവർക്ക്, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ വേർതിരിക്കലും വേർതിരിച്ചെടുക്കലും ഒരു അധ്വാന-തീവ്രമായ ജോലിയാണ്.
വിപണിയിലെ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ഐസൊലേഷനും എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ കിറ്റുകളും ഇപ്പോൾ പക്വത പ്രാപിച്ചിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ നിരവധി ബ്രാൻഡുകളുണ്ട്, പക്ഷേ അവ ഏകദേശം സമാനമാണ്.അത് ഒരു സിലിക്ക ജെൽ മെംബ്രൻ കോളം സെൻട്രിഫ്യൂഗൽ കിറ്റായാലും മാഗ്നെറ്റിക് ബീഡ് മെത്തേഡ് കിറ്റായാലും, ഇതിന് വളരെയധികം സമയമെടുക്കുകയും ചെലവേറിയതുമാണ്.കിറ്റിന്റെ വില കൂടാതെ, ലബോറട്ടറി ഉപകരണങ്ങൾക്ക് പ്രത്യേക ആവശ്യകതകളും ഉണ്ട്.മാഗ്നെറ്റിക് ബീഡ് രീതിയിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഓട്ടോമേറ്റഡ് വർക്ക്സ്റ്റേഷൻ വളരെ സാധാരണമായ വലിയ തോതിലുള്ള ഉയർന്ന മൂല്യമുള്ള ഉപകരണമാണ്, ഇത് ലബോറട്ടറിക്ക് വലിയ ചെലവാണ്.
ചുരുക്കത്തിൽ
പിസിആർ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തുന്നതിന് മുമ്പ്, സാമ്പിളുകളുടെ മുൻകൂർ ചികിത്സ ഗവേഷകർക്ക് അനിവാര്യവും എപ്പോഴും തലവേദനയുമാണ്.ഈ പ്രശ്നം എങ്ങനെ പരിഹരിക്കാം, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ വേർപെടുത്താതെയും വേർതിരിച്ചെടുക്കാതെയും PCR പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്താനാകുമോ എന്നത് ഭൂരിഭാഗം ശാസ്ത്ര ഗവേഷകരുടെയും ക്ലിനിക്കൽ ലബോറട്ടറി ജീവനക്കാരുടെയും ചിന്തയാണ്.
ഫോർജീന്റെ പരിഹാരം
ഡയറക്ട് പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയിലും അനുബന്ധ കിറ്റുകളിലും വർഷങ്ങളോളം നീണ്ടുനിന്ന കഠിനമായ ഗവേഷണത്തിന് ശേഷം, ഫോർജീൻ നിരവധി തടസ്സങ്ങൾ മറികടക്കുകയും ശക്തമായ പ്രതിരോധവും പൊരുത്തപ്പെടുത്തലും ഉള്ള വിവിധ സാമ്പിളുകൾക്കായി നേരിട്ടുള്ള പിസിആർ വിജയകരമായി നേടുകയും ചെയ്തു.ഇത് എല്ലാവരുടെയും അദ്ധ്വാന തീവ്രത ഗണ്യമായി കുറയ്ക്കുകയും പരീക്ഷണ പ്രക്രിയ വേഗത്തിലാക്കുകയും ശാസ്ത്രീയ ഗവേഷണ-പരിശോധനാ ചെലവുകൾ ലാഭിക്കുകയും ചെയ്യും.
DirectPCR-നെ കുറിച്ചുള്ള ഫോർജീന്റെ ധാരണയും അറിവും
ആദ്യം, ഡയറക്ട്പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യ വിവിധ ജൈവ സാമ്പിൾ ടിഷ്യൂകൾക്കുള്ള നേരിട്ടുള്ള പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയാണ്.ഈ സാങ്കേതിക അവസ്ഥയിൽ, ന്യൂക്ലിക് ആസിഡുകൾ വേർതിരിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുക്കേണ്ട ആവശ്യമില്ല, ടിഷ്യു സാമ്പിൾ നേരിട്ട് വസ്തുവായി ഉപയോഗിക്കുന്നു, കൂടാതെ പിസിആർ പ്രതികരണത്തിനായി ടാർഗെറ്റ് ജീൻ പ്രൈമറുകൾ ചേർക്കുന്നു.
രണ്ടാമതായി, ഡയറക്ട്പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യ ഒരു പരമ്പരാഗത ഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യ മാത്രമല്ല, ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ പിസിആറും ഉൾപ്പെടുന്നു.
മൂന്നാമതായി, ഡയറക്ട്പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യ ടിഷ്യൂ സാമ്പിളുകളിൽ സാധാരണ ഗുണപരമായ പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങൾ നടത്തുക മാത്രമല്ല, തത്സമയ qPCR പ്രതികരണങ്ങളും ഉൾപ്പെടുന്നു, ഇതിന് പശ്ചാത്തല ഫ്ലൂറസെൻസ് ഇടപെടലിനെ ചെറുക്കാനും എൻഡോജെനസ് ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വഞ്ചറുകളെ എതിർക്കാനുമുള്ള ശക്തമായ കഴിവ് പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിന് ആവശ്യമാണ്.
നാലാമതായി, DirectPCR സാങ്കേതികവിദ്യ ലക്ഷ്യമിടുന്ന ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾക്ക് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ടെംപ്ലേറ്റുകളുടെ പ്രകാശനം മാത്രമേ ആവശ്യമുള്ളൂ, PCR പ്രതികരണത്തെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന പ്രോട്ടീനുകൾ, പോളിസാക്രറൈഡുകൾ, ഉപ്പ് അയോണുകൾ മുതലായവ നീക്കം ചെയ്യരുത്.ഇതിന് പ്രതിപ്രവർത്തന സംവിധാനത്തിലെ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് പോളിമറേസും പിസിആർ മിക്സും മികച്ച ആന്റി-റിവേർസിബിലിറ്റിയും അഡാപ്റ്റബിലിറ്റിയും ഉണ്ടായിരിക്കണം, കൂടാതെ സങ്കീർണ്ണമായ സാഹചര്യങ്ങളിൽ എൻസൈം പ്രവർത്തനവും റെപ്ലിക്കേഷൻ കൃത്യതയും ഉറപ്പാക്കാൻ കഴിയും.
അഞ്ചാമതായി, DirectPCR സാങ്കേതികവിദ്യ ലക്ഷ്യമിടുന്ന ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സമ്പുഷ്ടീകരണ ചികിത്സയ്ക്ക് വിധേയമാക്കിയിട്ടില്ല, കൂടാതെ ടെംപ്ലേറ്റ് അളവ് വളരെ ചെറുതാണ്, ഇതിന് പ്രതികരണ സംവിധാനത്തിന്റെ ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമതയും ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയും ആവശ്യമാണ്.
ഉപസംഹാരം
പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ ജനനത്തിനു ശേഷമുള്ള കഴിഞ്ഞ 30 വർഷത്തിനിടയിലെ ഏറ്റവും പ്രധാനപ്പെട്ട സാങ്കേതിക സംഭവവികാസങ്ങളിലും പുതുമകളിലും ഒന്നാണ് ഡയറക്ട്പിസിആർ സാങ്കേതികവിദ്യ.ഫോർജെൻ ഈ സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ തുടക്കക്കാരനും നവീകരണക്കാരനുമായി തുടരും.
DirectPCR സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ ആപ്ലിക്കേഷൻ സാധ്യത വളരെ വിശാലമാണ്.ഈ സാങ്കേതികവിദ്യയുടെ തുടർച്ചയായ മെച്ചപ്പെടുത്തലും പ്രോത്സാഹനവും തീർച്ചയായും ശാസ്ത്രീയ ഗവേഷണത്തിലും പരിശോധനാ പ്രവർത്തനങ്ങളിലും വിനാശകരമായ മാറ്റങ്ങൾ കൊണ്ടുവരും.ഇതൊരു PCR സാങ്കേതിക വിപ്ലവമാണ്.
പോസ്റ്റ് സമയം: ഫെബ്രുവരി-21-2017
