W:സഹോദരൻ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പൂർത്തിയായി, അവസാന ഘട്ടം - ഫ്ലൂറസെന്റ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR!ഹേയ്, സഹോദരാ, എന്താണ് തത്സമയ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് PCR?
M:PCR നിങ്ങൾക്ക് എപ്പോഴും അറിയാം, അല്ലേ?
W:നിങ്ങൾക്കറിയാമോ, PCR എന്നത് പോളിമറേസ് ചെയിൻ റിയാക്ഷൻ ആണ്, അത് ഡിഎൻഎ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്ന ഒരു സാങ്കേതികവിദ്യയാണ്!
എം:ഇത് ഏറെക്കുറെ... നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകളിലൂടെ ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസ് ഒരു ദശലക്ഷത്തിലധികം തവണ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു സാങ്കേതിക രീതിയാണ് ഇത്, എന്നാൽ ഇത് ടാർഗെറ്റ് സീക്വൻസിൻറെ സാന്നിധ്യം അല്ലെങ്കിൽ അഭാവം സൂചിപ്പിക്കുന്നു, കൂടാതെ പ്രാരംഭ ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയില്ല.ഈ പ്രശ്നം പരിഹരിക്കാൻ വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത ഒരു സാങ്കേതിക രീതിയാണ് ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പിസിആർ.റിയൽ ടൈം പിസിആർ, ക്വാണ്ടിറ്റി പിസിആർ (qPCR) എന്നിവ സാധാരണയായി ഇതിനെ പരാമർശിക്കുന്നു.
W:സാധാരണ PCR-ൽ നിന്നുള്ള വ്യത്യാസം ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷനിലാണോ?
എം: അതെ, അതായത്, ഓരോ പിസിആർ സൈക്കിളിന്റെയും വിപുലീകരണ ഘട്ടത്തിൽ, ഫ്ലൂറസെൻസ് സിഗ്നൽ തീവ്രത കണ്ടെത്തി, സിഗ്നൽ തീവ്രതയുടെ മാറ്റത്തിനനുസരിച്ച് പ്രാരംഭ ടെംപ്ലേറ്റ് തുക കണക്കാക്കാം.
W:ഇത് വളരെ സങ്കീർണ്ണമായി തോന്നുന്നു!ഞാൻ ഇത് സ്വയം കണക്കാക്കേണ്ടതുണ്ടോ?
എം: ഇത് നിങ്ങൾ പതുക്കെ പഠിക്കേണ്ടതുണ്ട്, തത്വം മനസ്സിലാക്കാൻ കഴിയുന്നതാണ് നല്ലത്.ഇപ്പോൾ നിങ്ങൾക്ക് ആദ്യം സിടി മൂല്യത്തിൽ ശ്രദ്ധ കേന്ദ്രീകരിക്കാം, ഇത് താരതമ്യേന അവബോധജന്യമായ പരീക്ഷണാത്മക ഡാറ്റയാണ്, അതിന്റെ വലുപ്പം പ്രാരംഭ ടെംപ്ലേറ്റ് തുകയുടെ വലുപ്പവുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവുകൾ, മെൽറ്റിംഗ് കർവുകൾ തുടങ്ങിയ ഗ്രാഫുകളും ഉണ്ട്.നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണം വിജയകരമാണോ അല്ലയോ എന്ന കാര്യത്തിൽ അവർക്കാണ് അന്തിമ തീരുമാനം.
പ: ഓ, സഹോദരാ.അപ്പോൾ ഞാൻ qPCR പരീക്ഷണം നടത്താൻ പോകുന്നു!
എം: റീജന്റ് ഏരിയയിലേക്ക് ടെംപ്ലേറ്റുകൾ ചേർക്കാതിരിക്കാൻ പ്രത്യേകം ശ്രദ്ധിക്കുക, അല്ലാത്തപക്ഷം നിങ്ങളുടെ ഉപയോഗിക്കാത്ത മിശ്രിതം എളുപ്പത്തിൽ മലിനമാകും!
W: മനസ്സിലായി!

റിയൽ ടൈം PCR Easyᴹ-SYBR ഗ്രീൻ ഐ കിറ്റ്

ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമത, കൂടുതൽ പ്രത്യേകത
ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമത, നല്ല അനുയോജ്യത