പിസിആർ പ്രതികരണത്തിന്റെ ഏറ്റവും വലിയ സവിശേഷത അതിന്റെ വലിയ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ ശേഷിയും വളരെ ഉയർന്ന സംവേദനക്ഷമതയുമാണ്.പിസിആർ പ്രകടനവും കണ്ടെത്തൽ കാര്യക്ഷമതയും മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിന്, പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കപ്പാസിറ്റിയും ഡിറ്റക്ഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും മെച്ചപ്പെടുത്താൻ ഞങ്ങൾ പ്രതിജ്ഞാബദ്ധരാണ്, പക്ഷേ തലവേദന പരീക്ഷണ പ്രക്രിയയിലാണ്.തെറ്റായ പോസിറ്റീവുകൾ പലപ്പോഴും സംഭവിക്കാറുണ്ട്, വളരെ ചെറിയ അളവിലുള്ള സാമ്പിൾ ക്രോസ്-മലിനീകരണം അല്ലെങ്കിൽ PCR ഉൽപ്പന്ന മലിനീകരണം പരീക്ഷണത്തിൽ തെറ്റായ പോസിറ്റീവുകൾക്ക് കാരണമായേക്കാം.
അഞ്ച് തരം പിസിആർ ഉൽപ്പന്ന മലിനീകരണം
പിസിആർ മലിനീകരണത്തിന് നിരവധി കാരണങ്ങളുണ്ട്, അവയെ ഇനിപ്പറയുന്ന വിഭാഗങ്ങളായി തിരിക്കാം:
സ്പെസിമെൻ മലിനീകരണം പ്രധാനമായും ഉണ്ടാകുന്നത് സ്പെസിമെൻ ശേഖരിക്കുന്നതിനുള്ള കണ്ടെയ്നറിന്റെ മലിനീകരണം മൂലമാണ്, അല്ലെങ്കിൽ സ്പെസിമെൻ സ്ഥാപിക്കുമ്പോൾ, അയഞ്ഞ സീലിംഗ് കാരണം അത് കണ്ടെയ്നറിൽ നിന്ന് പുറത്തേക്ക് ഒഴുകുന്നു, അല്ലെങ്കിൽ സ്പെസിമെൻ കണ്ടെയ്നറിന് പുറത്ത് പറ്റിനിൽക്കുന്നു, ഇത് ക്രോസ്-മലിനീകരണത്തിന് കാരണമാകുന്നു;മലിനീകരണം മാതൃകകൾ തമ്മിലുള്ള മലിനീകരണത്തിലേക്ക് നയിക്കുന്നു;ചില സൂക്ഷ്മജീവികളുടെ മാതൃകകൾ, പ്രത്യേകിച്ച് വൈറസുകൾ, എയറോസോളുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പടരുകയോ എയറോസോൾ രൂപപ്പെടുകയോ ചെയ്യാം, ഇത് പരസ്പര മലിനീകരണത്തിന് കാരണമാകുന്നു.
പ്രധാന കാരണം, പിസിആർ റിയാഗന്റുകൾ തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ, സാമ്പിൾ തോക്ക്, കണ്ടെയ്നർ, ഇരട്ട വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം, മറ്റ് ലായനികൾ എന്നിവ പിസിആർ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് ടെംപ്ലേറ്റ് വഴി മലിനീകരിക്കപ്പെടുന്നു എന്നതാണ്.
മോളിക്യുലാർ ബയോളജി ലബോറട്ടറികളിലും ക്ലോൺ ചെയ്ത പ്ലാസ്മിഡുകൾ പോസിറ്റീവ് കൺട്രോളുകളായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ചില ലബോറട്ടറികളിലും, ക്ലോൺ ചെയ്ത പ്ലാസ്മിഡ് മലിനീകരണത്തിന്റെ പ്രശ്നവും സാധാരണമാണ്.യൂണിറ്റ് വോളിയത്തിൽ ക്ലോണിംഗ് പ്ലാസ്മിഡിന്റെ ഉള്ളടക്കം വളരെ ഉയർന്നതാണ്, കൂടാതെ ശുദ്ധീകരണ പ്രക്രിയയിൽ കൂടുതൽ ഉപകരണങ്ങളും റിയാക്ടറുകളും ആവശ്യമാണ്, കൂടാതെ ജീവനുള്ള കോശങ്ങളുടെ ശക്തമായ വളർച്ചയും പുനരുൽപാദന ശേഷിയും കാരണം ജീവനുള്ള കോശങ്ങളിലെ പ്ലാസ്മിഡ് മലിനമാകാൻ സാധ്യതയുണ്ട്.
പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങളിലെ ഏറ്റവും സാധാരണമായ മലിനീകരണ പ്രശ്നമാണ് ആംപ്ലിഫൈഡ് ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ മലിനീകരണം.PCR ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ പകർപ്പ് അളവ് വലുതായതിനാൽ (സാധാരണയായി 1013 പകർപ്പുകൾ/ml), ഇത് PCR ഡിറ്റക്ഷൻ കോപ്പി നമ്പറിന്റെ പരിധിയേക്കാൾ വളരെ കൂടുതലാണ്, വളരെ ചെറിയ അളവിലുള്ള PCR ഉൽപ്പന്ന മലിനീകരണം തെറ്റായ പോസിറ്റീവുകൾക്ക് കാരണമാകും.
പിസിആർ ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെ മലിനീകരണത്തിന്റെ ഏറ്റവും സാധ്യതയുള്ള രൂപമാണ് എയറോസോൾ മലിനീകരണം, മാത്രമല്ല ഇത് അവഗണിക്കപ്പെടാൻ ഏറ്റവും എളുപ്പവുമാണ്.ദ്രാവക ഉപരിതലവും വായുവും തമ്മിലുള്ള ഘർഷണം മൂലമാണ് ഇത് രൂപപ്പെടുന്നത്.സാധാരണയായി, ലിഡ് തുറക്കുമ്പോഴോ, സാമ്പിൾ ആസ്പിരേറ്റ് ചെയ്യുമ്പോഴോ, അല്ലെങ്കിൽ റിയാക്ഷൻ ട്യൂബ് ശക്തമായി കുലുക്കുമ്പോഴോ എയറോസോൾ മലിനീകരണം ഉണ്ടാകാം.കണക്കുകൂട്ടലുകൾ അനുസരിച്ച്, ഒരു എയറോസോൾ കണികയ്ക്ക് 48,000 കോപ്പികൾ അടങ്ങിയിരിക്കാം, അതിനാൽ അത് മൂലമുണ്ടാകുന്ന മലിനീകരണം പ്രത്യേക ശ്രദ്ധ അർഹിക്കുന്ന ഒരു പ്രശ്നമാണ്.
പ്രത്യേകിച്ചും, ടെസ്റ്റിംഗ് ലബോറട്ടറികൾ ഒരു പ്രത്യേക ജീൻ പരീക്ഷിക്കാൻ ഒരേ ജോടി പ്രൈമറുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.കാലക്രമേണ, ലബോറട്ടറി സ്ഥലത്ത് വലിയ അളവിൽ പിസിആർ ഉൽപ്പന്ന മലിനീകരണം സംഭവിക്കും.ഒരിക്കൽ അത്തരം മലിനീകരണം സംഭവിച്ചാൽ, ചുരുങ്ങിയ സമയത്തിനുള്ളിൽ അത് ഇല്ലാതാക്കാൻ പ്രയാസമാണ്.
ആദ്യത്തെ മൂന്ന് തരം മലിനീകരണത്തിന്, ഒഴിവാക്കാൻ ഫലപ്രദമായ മാർഗങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കാം, എന്നാൽ പിസിആർ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ മൂലമുണ്ടാകുന്ന മലിനീകരണം തടയാൻ പ്രയാസമാണ്, പ്രത്യേകിച്ച് നിലവാരമില്ലാത്ത പിസിആർ ലബോറട്ടറികളുടെ നിർമ്മാണത്തിൽ.പിസിആർ പ്രക്രിയയിൽ, പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പ് ദ്രാവകം വലിച്ചെടുക്കുകയും ഊതുകയും ചെയ്യുമ്പോൾ, പിസിആർ ട്യൂബ് കവർ തുറക്കുമ്പോൾ, ഒരു എയറോസോൾ രൂപപ്പെടും.എയറോസോൾ വഹിക്കുന്ന ഡിഎൻഎ തന്മാത്രകൾ (ഒരു എയറോസോളിന് പതിനായിരക്കണക്കിന് ഡിഎൻഎ വഹിക്കാൻ കഴിയും) അവ വായുവിൽ പൊങ്ങിക്കിടക്കുന്നതിനാൽ ഇല്ലാതാക്കാൻ പ്രയാസമാണ്.പിസിആർ പരീക്ഷണങ്ങളുടെ അടുത്ത ഘട്ടം അവതരിപ്പിച്ചുകഴിഞ്ഞാൽ, തെറ്റായ പോസിറ്റീവുകൾ അനിവാര്യമായും സംഭവിക്കും.
ചുവടെയുള്ള ചിത്രത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണം, താൽപ്പര്യത്തിന്റെ അനുബന്ധ ബാൻഡ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു:
പിസിആർ മലിനീകരണവും പ്രതിരോധവും സംബന്ധിച്ച ഈ വിഷയത്തിന്റെ ആദ്യഭാഗം ഇവിടെ പരിചയപ്പെടുത്തുന്നു.അടുത്ത ലക്കം "പിസിആർ ഉൽപ്പന്ന മലിനീകരണം തടയൽ" എന്ന രണ്ടാം ഭാഗം നിങ്ങൾക്ക് കൊണ്ടുവരും, അതിനാൽ കാത്തിരിക്കുക!
പോസ്റ്റ് സമയം: ജൂലൈ-25-2017
