പതിവുചോദ്യങ്ങൾഅനിമൽ ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ്

നിങ്ങൾ നേരിട്ടേക്കാവുന്ന പ്രശ്നങ്ങളുടെ ഇനിപ്പറയുന്ന വിശകലനംമൃഗങ്ങളുടെ ടിഷ്യു/കോശ RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നില്ല അല്ലെങ്കിൽ ആർ‌എൻ‌എ വിളവ് കുറവാണ്

വീണ്ടെടുക്കൽ കാര്യക്ഷമതയെ ബാധിക്കുന്ന വിവിധ ഘടകങ്ങളുണ്ട്, അവ: ടിഷ്യു സാമ്പിൾ ആർഎൻഎ ഉള്ളടക്കം, പ്രവർത്തന രീതി, എല്യൂഷൻ വോളിയം മുതലായവ.

1. ഓപ്പറേഷൻ സമയത്ത് ഐസ് ബാത്ത് അല്ലെങ്കിൽ ക്രയോജനിക് (4 °C) സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തി.

ശുപാർശ: മുഴുവൻ പ്രക്രിയയിലുടനീളം ഊഷ്മാവിൽ (15-25 ° C) പ്രവർത്തിക്കുക, കുറഞ്ഞ ഊഷ്മാവിൽ ഐസ് ബാത്ത്, സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യരുത്.

2. തെറ്റായ സാമ്പിൾ സംരക്ഷണം അല്ലെങ്കിൽ അമിതമായ സാമ്പിൾ സംഭരണ ​​സമയം.

ശുപാർശ: -80 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സാമ്പിളുകൾ സംഭരിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ ലിക്വിഡ് നൈട്രജനിൽ ഫ്രീസ് ചെയ്യുക, ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഥോ ഉപയോഗം ഒഴിവാക്കുക;ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ പുതിയ ടിഷ്യു അല്ലെങ്കിൽ കൾച്ചർഡ് സെല്ലുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക.

3. അപര്യാപ്തമായ സാമ്പിൾ ലിസിസ്.

ശുപാർശ: ടിഷ്യു ഏകതാനമാക്കുമ്പോൾ, ടിഷ്യു മതിയായ ഏകീകൃതമാണെന്നും ആർഎൻഎയുടെ പ്രകാശനം വിശദീകരിക്കാൻ ടിഷ്യു കോശങ്ങൾ വേണ്ടത്ര വിഭജിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ടെന്നും ഉറപ്പാക്കുക.

4. എല്യൂന്റ് ശരിയായി ചേർത്തിട്ടില്ല.

ശുപാർശ: RNase-Free ddH എന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുക₂പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം മെംബ്രണിന്റെ മധ്യത്തിൽ ഡ്രോപ്പ്വൈസ് ആയി O ചേർക്കുന്നു.

5. ബഫർ RL2 അല്ലെങ്കിൽ Buffer RW2 എന്നിവയിലേക്ക് കേവല എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർത്തിട്ടില്ല.

ശുപാർശ: നിർദ്ദേശങ്ങൾ പാലിക്കുക, ബഫർ RL2, ബഫർ RW2 എന്നിവയിലേക്ക് സമ്പൂർണ്ണ എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർക്കുക, കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി ഇളക്കുക.

6. ടിഷ്യു സാമ്പിൾ ഡോസ് ഉചിതമല്ല.

ശുപാർശ: 10-20 മില്ലിഗ്രാം ടിഷ്യു ഉപയോഗിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ (1-5) × 10⁶500 μl ബഫർ RL1 കോശങ്ങൾ, കാരണം അമിതമായ ടിഷ്യു ഉപയോഗം RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ കുറയുന്നതിന് കാരണമാകും.

7. തെറ്റായ എല്യൂഷൻ വോളിയം അല്ലെങ്കിൽ അപൂർണ്ണമായ എല്യൂഷൻ.

ശുപാർശ: ശുദ്ധീകരണ നിരയുടെ എല്യൂഷൻ വോളിയം 50-200 μl ആണ്;എല്യൂഷൻ ഇഫക്റ്റ് തൃപ്തികരമല്ലെങ്കിൽ, മുൻകൂട്ടി ചൂടാക്കിയ RNase-Free ddH ചേർത്തതിന് ശേഷം റൂം ടെമ്പറേച്ചർ പ്ലേസ്മെന്റ് സമയം നീട്ടാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.₂O, ഉദാഹരണത്തിന് 5-10 മിനിറ്റ്.

8.ബഫർ RW2 കഴുകിയതിന് ശേഷം ശുദ്ധീകരണ നിരയിൽ എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം ഉണ്ട്.

ശുപാർശ: ബഫർ RW2 കഴുകിയതിന് ശേഷം എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം ഉണ്ടെങ്കിൽ, 1 മിനിറ്റ് ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ, ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ പ്രവർത്തനത്തിനുള്ള സമയം 2 മിനിറ്റായി വർദ്ധിപ്പിക്കാം, അല്ലെങ്കിൽ ശേഷിക്കുന്ന എത്തനോൾ വേണ്ടത്ര നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ ശുദ്ധീകരണ കോളം സ്ഥാപിക്കാം.

ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെട്ട ആർ.എൻ.എ

ശുദ്ധീകരിച്ച ആർഎൻഎയുടെ ഗുണനിലവാരം സാമ്പിളിന്റെ സംരക്ഷണം, ആർഎൻഎസിന്റെ മലിനീകരണം, കൃത്രിമത്വം തുടങ്ങിയ ഘടകങ്ങളുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.

1. ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ കൃത്യസമയത്ത് സൂക്ഷിക്കുന്നില്ല.

ശുപാർശ: ശേഖരണത്തിന് ശേഷം ടിഷ്യു സാമ്പിളുകളോ കോശങ്ങളോ സമയബന്ധിതമായി ഉപയോഗിച്ചില്ലെങ്കിൽ, ഉടൻ തന്നെ -80 °C അല്ലെങ്കിൽ ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ ക്രയോപ്രിസർവ് ചെയ്യുക.ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌റ്റുചെയ്യാൻ, സാധ്യമാകുമ്പോഴെല്ലാം പുതുതായി എടുത്ത ടിഷ്യൂ അല്ലെങ്കിൽ സെൽ സാമ്പിൾ ഉപയോഗിക്കുക.

2. ടിഷ്യു സാമ്പിളുകളുടെ ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-തവിംഗ്.

ശുപാർശ: ടിഷ്യൂ സാമ്പിളുകൾ സൂക്ഷിക്കുമ്പോൾ, സംരക്ഷണത്തിനായി ചെറിയ കഷണങ്ങളാക്കി മുറിക്കുന്നതാണ് നല്ലത്, സാമ്പിൾ ആവർത്തിച്ച് മരവിപ്പിക്കുന്നതും ആർഎൻഎയുടെ അപചയവും ഒഴിവാക്കാൻ അവ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ ഒരു കഷണം നീക്കം ചെയ്യുക.

3. ഓപ്പറേഷൻ സമയത്ത് RNase അവതരിപ്പിച്ചു അല്ലെങ്കിൽ ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകൾ, മാസ്കുകൾ മുതലായവ ധരിക്കുന്നില്ല.

ശുപാർശ: പ്രത്യേക ആർഎൻഎ കൃത്രിമ മുറികളിൽ ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ പരീക്ഷണങ്ങൾ മികച്ച രീതിയിൽ നടത്തുന്നു, പരീക്ഷണത്തിന് മുമ്പ് പട്ടിക മായ്‌ക്കുന്നു.

RNase ന്റെ ആമുഖം മൂലമുണ്ടാകുന്ന RNA ഡീഗ്രഡേഷൻ കുറയ്ക്കുന്നതിന് പരീക്ഷണ വേളയിൽ ഡിസ്പോസിബിൾ കയ്യുറകളും മാസ്കുകളും ധരിക്കുക.

4. ഉപയോഗ സമയത്ത് RNase ഉപയോഗിച്ച് റിയാഗന്റുകൾ മലിനമാകുന്നു.

ശുപാർശ: അനുബന്ധ പരീക്ഷണങ്ങൾക്കായി ഒരു പുതിയ അനിമൽ ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് മാറ്റിസ്ഥാപിക്കുക.

5. ആർഎൻഎ കൃത്രിമത്വത്തിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, നുറുങ്ങുകൾ മുതലായവ RNase കൊണ്ട് മലിനമായിരിക്കുന്നു.

ശുപാർശ: ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌ഷനിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബുകൾ, നുറുങ്ങുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ തുടങ്ങിയവയെല്ലാം RNase-ഫ്രീ ആണെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുക.

ശുദ്ധീകരിച്ച ആർഎൻഎ താഴത്തെ പരീക്ഷണങ്ങളെ ബാധിക്കുന്നു

പ്യൂരിഫിക്കേഷൻ കോളം വഴി ശുദ്ധീകരിച്ച ആർഎൻഎ, ഉപ്പ് അയോണുകൾ, പ്രോട്ടീൻ ഉള്ളടക്കം വളരെ വലുതാണെങ്കിൽ, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ, നോർത്തേൺ ബ്ലോട്ട് തുടങ്ങിയവ പോലുള്ള താഴത്തെ പരീക്ഷണത്തെ ബാധിക്കും.

1. എല്യൂഷൻ ചെയ്ത ആർഎൻഎയിൽ ഉപ്പ് അയോൺ അവശിഷ്ടങ്ങളുണ്ട്.

ശുപാർശ: ബഫർ RW2-ൽ എത്തനോളിന്റെ ശരിയായ അളവ് ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുകയും പ്രവർത്തനത്തിനായി സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന അപകേന്ദ്ര വേഗതയിൽ 2 ശുദ്ധീകരണ കോളം കഴുകുകയും ചെയ്യുക;ഉപ്പ് അയോൺ അവശിഷ്ടങ്ങൾ ഉണ്ടെങ്കിൽ, ശുദ്ധീകരണ കോളം ബഫർ RW2-ലേക്ക് 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വയ്ക്കുകയും ഉപ്പ് മലിനീകരണം പരമാവധി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ നടത്തുകയും ചെയ്യുക.

2. എല്യൂഷൻ ചെയ്ത ആർഎൻഎയിലെ എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം.

ശുപാർശ: ബഫർ RW2 കഴുകിയ ശേഷം, പ്രവർത്തനത്തിനായി സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന അപകേന്ദ്രീകരണ വേഗതയിൽ ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ പ്രവർത്തനം നടത്തുക, ഇനിയും എത്തനോൾ അവശിഷ്ടം ഉണ്ടെങ്കിൽ ശൂന്യമായ ട്യൂബ് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ ഓപ്പറേഷൻ സമയം 2 മിനിറ്റായി വർദ്ധിപ്പിക്കുക, അല്ലെങ്കിൽ 5 മിനിറ്റ് ഊഷ്മാവിൽ വിടുക.

ന്യൂൽസിക് ആസിഡ് സാമ്പിൾ തരങ്ങളുടെ ഒറ്റപ്പെടുത്തൽ

ഫോർജീന്റെ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റുകൾക്ക് ഇനിപ്പറയുന്ന സാമ്പിൾ സോസുകളിൽ നിന്ന് പൂർണ്ണമായ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ/എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ ലഭിക്കും: മൃഗകലകൾ, സസ്യങ്ങൾ, കോശങ്ങൾ, വൈറൽ, രക്തം മുതലായവ.

കിറ്റ് എങ്ങനെ സംഭരിക്കും

24 മാസത്തേക്ക് മുറിയിലെ താപനില സംഭരണം.