പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങൾ നടത്തുമ്പോൾ എല്ലാവർക്കും അത്തരം അല്ലെങ്കിൽ അത്തരം പ്രശ്നങ്ങൾ എപ്പോഴും നേരിടേണ്ടിവരുമെന്ന് ഞാൻ വിശ്വസിക്കുന്നു, എന്നാൽ അവയിൽ മിക്കതും രണ്ട് പ്രധാന പ്രശ്നങ്ങളായി തരംതിരിക്കാം:

ജീൻ ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ വളരെ ചെറിയ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ (ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ);
വളരെയധികം നോൺ-ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ.
ഈ പ്രശ്നങ്ങൾ പരിഹരിക്കുന്നതിനുള്ള പൊതുവായ തന്ത്രങ്ങളിലൊന്നാണ് അഡിറ്റീവുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത്.സാധാരണയായി അഡിറ്റീവുകളുടെ പങ്ക് രണ്ട് വശങ്ങളുണ്ട്:
ദ്വിതീയ ഘടനജീനുകളുടെ (ദ്വിതീയ ഘടന);
നോൺ-സ്പെസിഫിക് പ്രൈമിംഗ് കുറയ്ക്കുക.
ഇന്ന്, പിസിആർ പ്രതികരണങ്ങളിലെ പൊതുവായ അഡിറ്റീവുകളും അവയുടെ പ്രവർത്തനങ്ങളും എഡിറ്റർ നിങ്ങൾക്ക് ഹ്രസ്വമായി പരിചയപ്പെടുത്തും.
ദ്വിതീയ ഘടന കുറയ്ക്കുന്ന അഡിറ്റീവുകൾ
സൾഫോക്സൈഡ്(DMSO)
ജീൻ സാമ്പിളുകൾഉയർന്ന ജിസി ഉള്ളടക്കം.എന്നിരുന്നാലും, DMSO ടാക് പോളിമറേസ് പ്രവർത്തനത്തെ വളരെയധികം കുറയ്ക്കുന്നു.അതിനാൽ, എല്ലാവരും ടെംപ്ലേറ്റ് പ്രവേശനക്ഷമതയും പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനവും സന്തുലിതമാക്കേണ്ടതുണ്ട്.നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണത്തിന് അനുയോജ്യമായ ഏകാഗ്രത കണ്ടെത്തുന്നതിന്, 2% മുതൽ 10% വരെ DSMO-യുടെ വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതകൾ പരീക്ഷിക്കാമെന്ന് എഡിറ്റർ നിർദ്ദേശിക്കുന്നു.
അയോണിക് അല്ലാത്ത ഡിറ്റർജന്റുകൾ
0.1-1% ട്രൈറ്റൺ X-100, ട്വീൻ 20 അല്ലെങ്കിൽ NP-40 പോലെയുള്ള അയോണിക് അല്ലാത്ത ഡിറ്റർജന്റുകൾ സാധാരണയായി ഡിഎൻഎ ദ്വിതീയ ഘടന കുറയ്ക്കുന്നു.ഇത് ടെംപ്ലേറ്റ് ജീനിന്റെ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ വർദ്ധിപ്പിക്കുമെങ്കിലും, ഇത് നിർദ്ദിഷ്ടമല്ലാത്ത ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ പ്രശ്‌നത്തിനും കാരണമാകും.അതിനാൽ, ഈ അഡിറ്റീവുകൾ അവശിഷ്ടങ്ങളില്ലാതെ കുറഞ്ഞ വിളവ് നൽകുന്ന PCR പ്രതികരണങ്ങൾക്ക് നന്നായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, എന്നാൽ താരതമ്യേന അശുദ്ധമായ PRC പ്രതികരണങ്ങൾക്ക് അത്ര നല്ലതല്ല.അയോണിക് അല്ലാത്ത ഡിറ്റർജന്റുകളുടെ മറ്റൊരു നേട്ടം എസ്ഡിഎസ് മലിനീകരണം കുറയ്ക്കുക എന്നതാണ്.സാധാരണയായി ഡിഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയയിൽ, എസ്ഡിഎസ് പിസിആർ ഘട്ടത്തിലേക്ക് കൊണ്ടുവരും, ഇത് പോളിമറേസിന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ വളരെയധികം തടയുന്നു.അതിനാൽ, പ്രതികരണത്തിലേക്ക് 0.5% ട്വീൻ -20 അല്ലെങ്കിൽ ട്വീൻ -40 ചേർക്കുന്നത് എസ്ഡിഎസിന്റെ പ്രതികൂല ഫലങ്ങളെ നിർവീര്യമാക്കും.
ബീറ്റെയ്ൻ_
ദ്വിതീയ ഘടന രൂപീകരണം കുറയ്ക്കുന്നതിലൂടെ ഡിഎൻഎ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ മെച്ചപ്പെടുത്താൻ ബീറ്റൈനിന് കഴിയും, ഇത് വാണിജ്യ പിസിആർ കിറ്റുകളുടെ ഒരു "നിഗൂഢമായ" കൂട്ടിച്ചേർക്കലാണ്.നിങ്ങൾക്ക് ബീറ്റൈൻ ഉപയോഗിക്കാൻ താൽപ്പര്യമുണ്ടെങ്കിൽ, നിങ്ങൾ ബീറ്റൈൻ അല്ലെങ്കിൽ ബീറ്റെയ്ൻ മോണോ-ഹൈഡ്രേറ്റ് (ബീറ്റൈൻ അല്ലെങ്കിൽ ബീറ്റൈൻ മോണോ-ഹൈഡ്രേറ്റ്) ഇടണം, എന്നാൽ ബീറ്റൈൻ ഹൈഡ്രോക്ലോറൈഡ് (ബെറ്റെയ്ൻ എച്ച്സിഎൽ) അല്ല, 1-1.7M എന്ന അന്തിമ സാന്ദ്രതയിലേക്ക് ക്രമീകരിക്കുക.ഡിഎൻഎ ഉരുകൽ/ഡിഎൻഎ ഡീനാറ്ററേഷന്റെ അടിസ്ഥാന ജോഡി കോമ്പോസിഷൻ ആശ്രിതത്വം ഇല്ലാതാക്കുന്നതിനാൽ, പ്രത്യേകത മെച്ചപ്പെടുത്താനും ബീറ്റൈനിന് കഴിയും.
നോൺ-സ്പെസിഫിക് പ്രൈമിംഗ് കുറയ്ക്കുന്നതിനുള്ള അഡിറ്റീവുകൾ
ഫോർമാമൈഡ്
ഫോർമാമൈഡ് സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു ഓർഗാനിക് പിസിആർ അഡിറ്റീവാണ്.ഡിഎൻഎയിലെ പ്രധാന ഗ്രോവ്, മൈനർ ഗ്രോവ് എന്നിവയുമായി ഇതിന് സംയോജിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, അതുവഴി മാസ്റ്റർ ഡിഎൻഎ ഇരട്ട ഹെലിക്‌സിന്റെ സ്ഥിരത കുറയ്ക്കുകയും ഡിഎൻഎയുടെ ഉരുകൽ താപനില കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.PCR പരീക്ഷണങ്ങളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഫോർമൈഡിന്റെ സാന്ദ്രത സാധാരണയായി 1%-5% ആണ്.
ടെട്രാമെഥൈൽഅമോണിയം ക്ലോറൈഡ്( TMAC)
ടെട്രാമെതൈലാമോണിയം ക്ലോറൈഡിന് ഹൈബ്രിഡൈസേഷന്റെ പ്രത്യേകത (ഹൈബ്രിഡൈസേഷൻ സ്പെസിഫിസിറ്റി) വർദ്ധിപ്പിക്കാനും ഡിഎൻഎയുടെ ഉരുകൽ താപനില വർദ്ധിപ്പിക്കാനും കഴിയും.അങ്ങനെ, ടിഎംഎസിക്ക് നോൺ-സ്പെസിഫിക് പ്രൈമിംഗ് നീക്കം ചെയ്യാനും DNA, RNA എന്നിവയുടെ തെറ്റായ ബൈൻഡിംഗ് കുറയ്ക്കാനും കഴിയും.നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽഡീജനറേറ്റ് പ്രൈമറുകൾPCR പ്രതികരണത്തിൽ, TMAC ചേർക്കാൻ ഓർക്കുക, ഇത് സാധാരണയായി 15-100mM സാന്ദ്രതയിൽ ഉപയോഗിക്കുന്നു.
മറ്റ് സാധാരണ അഡിറ്റീവുകൾ
മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ച രണ്ട് തരം അഡിറ്റീവുകൾക്ക് പുറമേ, പിസിആർ പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങളിൽ നിരവധി സാധാരണ അഡിറ്റീവുകൾ ഉണ്ട്, അവയ്ക്ക് വ്യത്യസ്ത പ്രവർത്തനങ്ങളുണ്ടെങ്കിലും അവ വളരെ പ്രധാനമാണ്.
മഗ്നീഷ്യം അയോൺ
മഗ്നീഷ്യം അയോൺ പോളിമറേസിന്റെ ഒഴിച്ചുകൂടാനാവാത്ത കോഫാക്ടർ (കോഫാക്ടർ) ആണ്, അതായത്, മഗ്നീഷ്യം അയോൺ ഇല്ലാതെ, പോളിമറേസ് നിഷ്ക്രിയമാണ്.എന്നിരുന്നാലും, വളരെയധികം മഗ്നീഷ്യം അയോണുകൾ പോളിമറേസിന്റെ കാര്യക്ഷമതയെ ബാധിക്കും.ഓരോ പിസിആർ പ്രതികരണത്തിലും മഗ്നീഷ്യം അയോണുകളുടെ സാന്ദ്രത വ്യത്യസ്തമായിരിക്കും.ചേലേറ്റിംഗ് ഏജന്റുകൾ (ഇഡിടിഎ അല്ലെങ്കിൽ സിട്രേറ്റ് പോലുള്ളവ), ഡിഎൻടിപികളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും സാന്ദ്രത മഗ്നീഷ്യം അയോണുകളുടെ സാന്ദ്രതയെ ബാധിക്കുന്നു.അതിനാൽ, നിങ്ങളുടെ PCR പരീക്ഷണത്തിൽ നിങ്ങൾക്ക് പ്രശ്‌നങ്ങളുണ്ടെങ്കിൽ, നിങ്ങൾക്ക് വ്യത്യസ്ത മഗ്നീഷ്യം അയോൺ കോൺസൺട്രേഷനുകൾ മാറ്റാൻ ശ്രമിക്കാം, ഉദാഹരണത്തിന്, 1.0 മുതൽ 4.0mM വരെ, ഇടയ്ക്ക് 0.5-1mM ഇടവേള.
ഒന്നിലധികം ഫ്രീസ്-ഥോ സൈക്കിളുകൾ മഗ്നീഷ്യം ക്ലോറൈഡ് ലായനിയുടെ ഏകാഗ്രത സ്‌ട്രിഫിക്കേഷനിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാം എന്നത് ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതാണ്.അതിനാൽ, ഓരോ ഉപയോഗത്തിനും മുമ്പ് നിങ്ങൾ ഇത് പൂർണ്ണമായും പിരിച്ചുവിടണം, ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് നന്നായി ഇളക്കുക.
ബോവിൻ സെറം ആൽബുമിൻ(ബോവിൻ ആൽബുമിൻ, ബിഎസ്എ)
മോളിക്യുലാർ കെമിസ്ട്രി പരീക്ഷണങ്ങളിൽ, ബോവിൻ സെറം ആൽബുമിൻ വളരെ സാധാരണമായ ഒരു അഡിറ്റീവാണ്, പ്രത്യേകിച്ച് നിയന്ത്രണ എൻസൈം ദഹനത്തിലും PCR പരീക്ഷണങ്ങളിലും.PCR പ്രതികരണങ്ങളിൽ, ഫിനോളിക് സംയുക്തങ്ങൾ പോലുള്ള മലിനീകരണം കുറയ്ക്കുന്നതിന് BSA സഹായകമാണ്.കൂടാതെ ടെസ്റ്റ് ട്യൂബിന്റെ ഭിത്തിയിൽ റിയാക്ടന്റുകളുടെ ഒട്ടിപ്പിടിക്കൽ കുറയ്ക്കാൻ ഇതിന് കഴിയുമെന്നും പറയപ്പെടുന്നു.പിസിആർ പ്രതികരണത്തിൽ, സാധാരണയായി ചേർത്ത ബിഎസ്എയുടെ സാന്ദ്രത 0.8 മില്ലിഗ്രാം / മില്ലിയിൽ എത്താം.
 
ബന്ധപ്പെട്ട ഉല്പന്നങ്ങൾ:
പിസിആർ ഹീറോ(ചായം കൊണ്ട്)
പിസിആർ ഹീറോ