രചയിതാക്കൾ: വാങ് സിയോയാൻ, ഷാവോ എറിയു

യൂണിറ്റ്: ജിയാവോ ഹോസ്പിറ്റൽ, ഡോങ്ഫാംഗ് ഹോസ്പിറ്റൽ ടോങ്ജി യൂണിവേഴ്സിറ്റിയുമായി അഫിലിയേറ്റ് ചെയ്തിരിക്കുന്നു

നിലവിൽ, ശ്വാസകോശ രോഗകാരിയായ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് കണ്ടെത്തുന്നതിനുള്ള പ്രധാന സാമ്പിൾ തരം തൊണ്ടയിലെ സ്രവമാണ്.സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന പല തരത്തിലുള്ള സാമ്പിൾ പ്രിസർവേഷൻ സൊല്യൂഷനുകളുണ്ട്, അവയെല്ലാം ഗതാഗതത്തിനും സംഭരണത്തിനുമായി ശീതീകരിക്കുകയോ ഫ്രീസുചെയ്യുകയോ ചെയ്യേണ്ടതുണ്ട്;ശേഖരണത്തിലും ഗതാഗത പ്രക്രിയയിലും കുറഞ്ഞ താപനിലയുടെ മുഴുവൻ പ്രക്രിയയും നിയന്ത്രിക്കുന്നത് ബുദ്ധിമുട്ടാണ്, സാമ്പിൾ പരിശോധനയ്ക്ക് മുമ്പ് ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം ഉറപ്പാക്കുന്നത് ബുദ്ധിമുട്ടാണ്.^[1-2].

ആർഎൻഎയെ ഹൈഡ്രോലൈസ് ചെയ്യുന്ന എൻഡോ ന്യൂക്ലീസാണ് RNase (RNase), പ്രധാനമായും ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകൾ തമ്മിലുള്ള ഫോസ്ഫോഡിസ്റ്റർ ബോണ്ടുകൾ വിച്ഛേദിക്കുന്നു.RNase തന്മാത്ര വളരെ സുസ്ഥിരമാണ്, ഘടനയിൽ ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകൾ ഉണ്ട്, അതിന്റെ പ്രവർത്തനത്തിന് ഡൈവാലന്റ് കാറ്റേഷനുകളുടെ സാന്നിധ്യം ആവശ്യമില്ല, അതിനാൽ RNase എളുപ്പത്തിൽ ഡീനാച്ചർ ചെയ്യപ്പെടുന്നില്ല, ഉയർന്ന താപനിലയോ ഡീനാറ്ററന്റുകൾ ഉപയോഗിച്ചോ പോലും ഇത് പുനർനിർമ്മിക്കാൻ എളുപ്പമാണ്.RNases എൻഡോജെനസ്, എക്സോജനസ് എന്നിങ്ങനെ തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.കോശങ്ങൾ പൊട്ടിത്തെറിക്കുന്ന സമയത്ത് എൻഡോജെനസ് RNases പുറത്തുവിടാം.അതിനാൽ, എൻഡോജെനസ് ആർ‌എൻ‌എസിന്റെ പങ്ക് ഇല്ലാതാക്കുന്നത് ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയയിലെ വളരെ നിർണായക ഘട്ടമാണ്.എക്സോജനസ് RNases വ്യാപകമായി വിതരണം ചെയ്യപ്പെടുന്നു.വായുവിലും മനുഷ്യന്റെ ചർമ്മത്തിലും മുടിയിലും ഉമിനീരിലും ആർ‌എൻ‌എസുകൾ നിലവിലുണ്ട്, അവ ആർ‌എൻ‌എയുടെ എളുപ്പത്തിലുള്ള നശീകരണത്തിനുള്ള പ്രധാന കാരണങ്ങളാണ്.^[3].

ഡാറ്റാ അന്വേഷണം

CANS-CL02-A009 സാങ്കേതിക ആവശ്യകതകളിൽ "തന്മാത്രാ രോഗനിർണയ മേഖലയിലെ മെഡിക്കൽ ലബോറട്ടറി ഗുണനിലവാരവും യോഗ്യത അക്രഡിറ്റേഷൻ മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങളും" അപേക്ഷയ്ക്ക് അനുസൃതമായി ഉചിതമായ ജല ഗുണനിലവാര മാനദണ്ഡങ്ങൾ രൂപപ്പെടുത്തണമെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുന്നു;ഡിസ്പോസിബിൾ എയർടൈറ്റ് കണ്ടെയ്നറുകൾ:

RNase/വർഗ്ഗീകരണം

(1) RNase A

ബോവിൻ പാൻക്രിയാസിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ Ribonuclease A (RNase A), ആർഎൻഎയിലെ പിരിമിഡൈൻ അവശിഷ്ടങ്ങളുടെ 3′ അറ്റത്തെ പ്രത്യേകമായി ആക്രമിക്കാൻ കഴിയുന്ന ഒരു എൻഡോറിബോ ന്യൂക്ലീസാണ്, തൊട്ടടുത്തുള്ള ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളാൽ രൂപം കൊള്ളുന്ന സൈറ്റോസിൻ അല്ലെങ്കിൽ യുറാസിൽ.ഫോസ്ഫോഡീസ്റ്റർ ബോണ്ട്, പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന്റെ അന്തിമ ഉൽപ്പന്നം 3′ പിരിമിഡിൻ ന്യൂക്ലിയോടൈഡും അവസാനം 3′ പിരിമിഡിൻ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുള്ള ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡും ആണ്.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae ൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞതാണ്, ഇത് ഗ്വാനൈനിന്റെ 3′-ടെർമിനൽ ഫോസ്ഫേറ്റിൽ പ്രത്യേകമായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, കൂടാതെ 3′ ഫോസ്ഫേറ്റിന്റെ ഗ്വാനിനും അടുത്തുള്ള ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളുടെ 5′ ഹൈഡ്രോക്സൈലിനും ഇടയിലാണ് പിളർപ്പ് സ്ഥലം.പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിന്റെ അന്തിമഫലം 3′ഗുവാനിലിക് ആസിഡും ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡ് ശകലങ്ങളും അവസാനം 3′ഗ്വാനിലിക് ആസിഡും ആണ്.

(3) RNase H

കാളക്കുട്ടിയുടെ തൈമസ് ടിഷ്യൂവിൽ നിന്നാണ് റിബോന്യൂക്ലീസ് എച്ച് (ആർനേസ് എച്ച്) ആദ്യമായി കണ്ടെത്തിയത്, അതിന്റെ എൻകോഡിംഗ് ജീൻ എസ്ഷെറിച്ചിയ കോളിയിലേക്ക് ക്ലോൺ ചെയ്തു.ഇതിന് ഡിഎൻഎയെ പ്രത്യേകമായി തരംതാഴ്ത്താൻ കഴിയും: ആർഎൻഎ ഹൈബ്രിഡ് ഡ്യുപ്ലെക്സുകളിലെ ആർഎൻഎ സ്ട്രാൻഡുകൾ, 3′-OH, 5′-മോണോഫോസ്ഫേറ്റ് അറ്റങ്ങളുള്ള ഒലിഗോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളും മോണോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളും ഉണ്ടാകുന്നു, ഇതിന് ഒറ്റ- അല്ലെങ്കിൽ ഇരട്ട-സ്ട്രാൻഡഡ് DNA അല്ലെങ്കിൽ RNA എന്നിവയെ തരംതാഴ്ത്താൻ കഴിയില്ല.

RNase

പ്രവർത്തനവും ഉപയോഗവും

റൈബോ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ (ആർഎൻഎ) അപചയത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കാനും കൃത്രിമമായി സമന്വയിപ്പിക്കാനും റൈബോ ന്യൂക്ലീസിന് കഴിയും.ആഘാതവും സന്ധി വേദനയും ചികിത്സിക്കാൻ ഔഷധ തൈലം പ്രാദേശികമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.റിപ്പോർട്ടുകൾ പ്രകാരം, റൈബോ ന്യൂക്ലീസിന് ഹോസ്റ്റ് സെൽ മെറ്റബോളിസത്തെ മാറ്റാനും വൈറസ് സംശ്ലേഷണത്തെ തടയാനും വിട്രോയിലെ ഇൻഫ്ലുവൻസ വൈറസിന്റെ വ്യാപനത്തെ തടയാനും ചിക്കൻ ഭ്രൂണങ്ങളിൽ വാക്സിനിയയും ഹെർപ്പസ് വൈറസും ഉണ്ടാകുന്നത് തടയാനും കഴിയും.റൈബോ ന്യൂക്ലീസിന്റെ ക്ലിനിക്കൽ ഉപയോഗം, 180 മില്ലിഗ്രാം ഇൻട്രാമുസ്കുലർ കുത്തിവയ്പ്പ്, പകർച്ചവ്യാധി എൻസെഫലൈറ്റിസ് ചികിത്സയ്ക്ക് ഗുണം ചെയ്യും, റൈബോ ന്യൂക്ലീസിന് റൈബോ ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിന്റെ (ആർഎൻഎ) നാശത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കാൻ കഴിയും, ഇപ്പോൾ ഇത് കൃത്രിമമായി സമന്വയിപ്പിക്കാനും കഴിയും.ആഘാതവും സന്ധി വേദനയും ചികിത്സിക്കാൻ ഔഷധ തൈലം പ്രാദേശികമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.റിപ്പോർട്ടുകൾ അനുസരിച്ച്, റൈബോ ന്യൂക്ലീസിന് ഹോസ്റ്റ് സെൽ മെറ്റബോളിസത്തെ മാറ്റാനും വൈറസ് സംശ്ലേഷണത്തെ തടയാനും വിട്രോയിലെ ഇൻഫ്ലുവൻസ വൈറസിന്റെ വ്യാപനത്തെ തടയാനും ചിക്കൻ ഭ്രൂണങ്ങളിൽ വാക്സിനിയയും ഹെർപ്പസ് വൈറസും ഉണ്ടാകുന്നത് തടയാനും കഴിയും.റൈബോ ന്യൂക്ലീസിന്റെ ക്ലിനിക്കൽ ഉപയോഗം, 180 മില്ലിഗ്രാം ഇൻട്രാമുസ്കുലർ കുത്തിവയ്പ്പ് ദിവസേന നൽകുന്നത് പകർച്ചവ്യാധി എൻസെഫലൈറ്റിസ് ചികിത്സയ്ക്ക് ഗുണം ചെയ്യും.

RNase

ഇൻഹിബിറ്റർ നിർവ്വചനം

RNase ഇൻഹിബിറ്റർ യൂണിറ്റിന്റെ നിർവ്വചനം: 5ng RNase A യുടെ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ 50% തടയാൻ ആവശ്യമായ എൻസൈമിന്റെ അളവ് ഒരു യൂണിറ്റാണ്.

RNase ഇൻഹിബിറ്ററുകൾ എങ്ങനെ പ്രവർത്തിക്കുന്നു

ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ്:

C2H6N4S എന്ന തന്മാത്രാ സൂത്രവാക്യമുള്ള ഒരു ജൈവ സംയുക്തമാണ് ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ്.ബയോളജിക്കൽ മെഡിസിൻ, കെമിക്കൽ റിയാഗന്റുകൾ മുതലായവയിൽ പ്രധാനമായും ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഗ്വാനിഡൈൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് ഒരു പ്രോട്ടീൻ ലൈസിംഗ് ഏജന്റാണ്, ഇത് മോളിക്യുലാർ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് റിയാക്ടറുകളിൽ ലിസിസ് ലായനിയുടെ പ്രധാന ഘടകമായി ഉപയോഗിക്കാറുണ്ട്.ഇതിന് ടിഷ്യു ലൈസ് ചെയ്യാനും കോശഘടന നശിപ്പിക്കാനും ന്യൂക്ലിയോപ്രോട്ടീനിൽ നിന്ന് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡിനെ വേർപെടുത്താനും കഴിയും, കൂടാതെ RNase-ലേക്ക് ശക്തമായ ഡീനാറ്ററേഷൻ ഉണ്ട്.ഇത് നിലവിൽ ഏറ്റവും ഫലപ്രദമായ RNase ഇൻഹിബിറ്ററാണ്.

കോശങ്ങളിൽ നിന്നോ ടിഷ്യൂകളിൽ നിന്നോ മൊത്തം ആർഎൻഎ നേരിട്ട് വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ കഴിയുന്ന ഒരു നോവൽ ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ റീജന്റാണ് ട്രൈസോൾ.ഇതിൽ ഫിനോൾ, ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് തുടങ്ങിയ പദാർത്ഥങ്ങൾ അടങ്ങിയിട്ടുണ്ട്, ഇത് കോശങ്ങളെ വേഗത്തിൽ തടസ്സപ്പെടുത്തുകയും കോശങ്ങൾ പുറത്തുവിടുന്ന ന്യൂക്ലിയസുകളെ തടയുകയും ചെയ്യും.

(എന്നിരുന്നാലും, ലാബ് ഗവേഷകരുടെ ആരോഗ്യത്തിന് ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് അപകടകരമാണ്.)

ആർനാസിൻ:

എലി കരളിൽ നിന്നോ മനുഷ്യ ബ്ലാസ്റ്റോഡെമിൽ നിന്നോ വേർതിരിച്ചെടുത്ത ആസിഡ് ഗ്ലൈക്കോപ്രോട്ടീൻ.RNase-ന്റെ ഒരു നോൺ-മത്സര ഇൻഹിബിറ്ററാണ് Rnasin, അവയെ നിർജ്ജീവമാക്കുന്നതിന് വിവിധ RNase കളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കാൻ കഴിയും.

(കൂടുതൽ വിശദാംശങ്ങൾ:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hഉയർന്ന താപനില:

ഉയർന്ന താപനിലയും പ്രോട്ടീൻ ഡീനാറ്ററേഷന്റെ ഒരു സാധാരണ മാർഗമാണ്.

ഡൈതൈൽപൈറോകാർബണേറ്റ് (DEPC):

DEPC ഒരു ശക്തവും എന്നാൽ അപൂർണ്ണവുമായ RNase ഇൻഹിബിറ്ററാണ്, RNase ആക്റ്റീവ് ഗ്രൂപ്പിലെ അമിനോ ആസിഡ് ഇമിഡാസോൾ റിംഗുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് പ്രോട്ടീനുകളെ നശിപ്പിക്കാൻ ഇത് RNase പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു.

വനാഡിൽ റൈബോ ന്യൂക്ലിയോസൈഡ് കോംപ്ലക്സ്:

വനേഡിയം ഓക്സൈഡ് അയോണുകളും ന്യൂക്ലിയോസൈഡുകളും ചേർന്ന് രൂപംകൊണ്ട ഒരു സമുച്ചയം, ഇത് പരിവർത്തന പദാർത്ഥങ്ങളുടെ രൂപത്തിൽ RNase- ലേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് RNase ന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ ഏതാണ്ട് പൂർണ്ണമായും തടയും.

മറ്റുള്ളവ:

എസ്‌ഡി‌എസ്, യൂറിയ, ഡയറ്റോമേഷ്യസ് എർത്ത് മുതലായവയ്ക്കും RNase-ൽ ഒരു നിശ്ചിത തടസ്സമുണ്ട്.

വിദഗ്ധ അവലോകനങ്ങൾ

ലി യുജി ചീഫ് ടെക്നീഷ്യൻ

ലബോറട്ടറി ഡിപ്പാർട്ട്‌മെന്റ് ഡയറക്ടർ, ജിയാവോ ഹോസ്പിറ്റൽ, ഡോങ്‌ഫാംഗ് ഹോസ്പിറ്റൽ ടോങ്‌ജി സർവകലാശാലയുമായി അഫിലിയേറ്റ് ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു

എക്സോജനസ് RNase-ന്റെ ബയോഡീഗ്രേഡേഷൻ തടയുന്നതിന്, RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ പ്രക്രിയയിൽ മാസ്കുകൾ, കയ്യുറകൾ, തൊപ്പികൾ എന്നിവ ഇടയ്ക്കിടെ ധരിക്കുകയും മാറ്റുകയും വേണം.എല്ലാ ഗ്ലാസ്വെയറുകളും 200 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 2 മണിക്കൂറിൽ കൂടുതൽ ഉണക്കുന്ന ഓവനിൽ ചുട്ടെടുക്കണം.ബേക്കിംഗിനായി ഉപയോഗിക്കുന്ന പ്ലാസ്റ്റിക്ക് പോലുള്ള വസ്തുക്കൾ ഡിഇപിസി വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കേണ്ടതുണ്ട്, തുടർന്ന് വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുക.ആർ‌എൻ‌എയുടെ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നതിനും സംരക്ഷിക്കുന്നതിനും തിരിച്ചറിയുന്നതിനും ഉപയോഗിക്കുന്ന റിയാക്ടറുകളോ ഉപകരണങ്ങളോ ആർ‌എൻ‌എയ്‌ക്കായി സമർപ്പിക്കുകയും ഒരു സ്വതന്ത്ര ആർ‌എൻ‌എ പ്രവർത്തന മേഖല സജ്ജീകരിക്കുകയും വേണം.

അവലംബങ്ങൾ:

[1] സ്മിത്ത്-വോൺ HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.ഓസ്‌ട്രേലിയൻ സ്വദേശികളായ കുട്ടികളിൽ നിശിത ലോവർ റെസ്പിറേറ്ററി അണുബാധകൾ ഉണ്ടാകുന്നതിന് തൊട്ടുമുമ്പ് നാസോഫറിനക്സിലെ ബാക്ടീരിയകളും വൈറസുകളും[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] ചൈനീസ് പ്രിവന്റീവ് മെഡിസിൻ അസോസിയേഷന്റെ ഹോസ്പിറ്റൽ ഇൻഫെക്ഷൻ കൺട്രോൾ ബ്രാഞ്ച്.ക്ലിനിക്കൽ മൈക്രോബയൽ മാതൃകകളുടെ ശേഖരണത്തിനും പരിശോധനയ്ക്കുമുള്ള മാർഗ്ഗനിർദ്ദേശങ്ങൾ [ജെ].ചൈനീസ് ജേണൽ ഓഫ് ഹോസ്പിറ്റൽ ഇൻഫെക്ഷൻ, 2018(20):3192-3200.

[3] “ക്ലിനിക്കൽ ടെസ്റ്റ് പതിനായിരം എന്തുകൊണ്ട് മോളിക്യുലാർ ബയോളജി ടെസ്റ്റ് വോളിയം”