ഗ്ലൂ റിക്കവറി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നതിനുള്ള നുറുങ്ങുകൾ

1. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് സമയത്ത് സാമ്പിൾ ലോഡ് വർദ്ധിപ്പിക്കുക.

2. പുതുതായി തയ്യാറാക്കിയ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ബഫർ ഉപയോഗിക്കുക.

3. പശ മുറിക്കുമ്പോൾ, പശ കട്ടിംഗിന്റെ അളവ് കുറയ്ക്കുന്നതിന് സ്ട്രിപ്പുകൾ ഉപയോഗിച്ച് പശ മാത്രം മുറിക്കാൻ ശ്രമിക്കുക: കുറച്ച് ഉദ്ദേശ്യ ശകലങ്ങളുള്ള പശ ആവശ്യമില്ല, അല്ലാത്തപക്ഷം ഇത് വീണ്ടെടുക്കൽ നിരക്കിനെ ബാധിക്കും.

4. രണ്ടോ അതിലധികമോ പശ കഷണങ്ങൾ ഉരുക്കിയ ശേഷം, വോളിയം എത്ര വലുതാണെങ്കിലും ഒരു ട്യൂബ് ഉപയോഗിച്ച് അതേ കോളത്തിലേക്ക് മാറ്റുക.

5. സോളിൽ ചേർത്തിരിക്കുന്ന ലായനി അൽപ്പം കൂടുതലായിരിക്കും, ഇത് ഡിഎൻഎയെ മെംബ്രണുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് കൂടുതൽ സഹായകമാണ്, എന്നാൽ പൊതുവെ 750ul-ൽ കൂടരുത്.

6. കോളത്തിലെ ലായനിയിലെ ഉപ്പ് സാന്ദ്രത, അസിഡിറ്റി (ചാർജ്), ഹൈഡ്രോഫോബിസിറ്റി എന്നിവയിലൂടെ ഡിഎൻഎയെ നിരയിലേക്ക് ബന്ധിപ്പിക്കുക എന്നതാണ് ജെൽ വീണ്ടെടുക്കലിന്റെ താക്കോൽ.അതിനാൽ, ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ബഫറിന്റെ pH വളരെ ഉയർന്നതാണെങ്കിൽ, സോളിലേക്ക് 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ചേർക്കാം;മെംബ്രണിലെ ഡിഎൻഎ തന്മാത്രകളെ നന്നായി തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതിന്, പശ അലിയിച്ചതിന് ശേഷം ദ്രാവകത്തിലേക്ക് ചൂടാക്കാൻ 30% ഐസോപ്രോപനോൾ ചേർക്കാം.

7. എല്യൂന്റ് ചേർക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, എത്തനോൾ പൂർണ്ണമായി ബാഷ്പീകരിക്കുന്നതിന് കുറച്ച് മിനിറ്റ് (ഏകദേശം 10 മിനിറ്റ്) ഊഷ്മാവിൽ കോളം വിടുക.

8. അവസാനമായി, റിക്കവറി വോളിയം കുറയ്ക്കുന്നതിന് കുറച്ച് എല്യൂന്റ് ചേർക്കുക.സാധാരണയായി, 30-50μl എല്യൂഷനാണ് എല്യൂഷനുപയോഗിക്കുന്നത് (വളരെ കുറവല്ല, അല്ലാത്തപക്ഷം മെംബ്രൺ നനയ്ക്കാൻ ഇതിന് കഴിയില്ല, ഇത് എല്യൂഷന് അനുയോജ്യമല്ല);മെംബ്രണുമായി ബന്ധിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ഡിഎൻഎയെ പൂർണ്ണമായി ഇല്ലാതാക്കാൻ, മെംബ്രണിന്റെ മധ്യഭാഗത്താണ് എല്യൂഷൻ ഡ്രോപ്ലെറ്റുകൾ.

9. എല്യൂവെന്റ് ചേർത്ത ശേഷം, അത് 5 മിനിറ്റ് നേരം 55 ഡിഗ്രി വാട്ടർ ബാത്തിൽ കളയുകയോ 10 മിനിറ്റിൽ കൂടുതൽ 50 ഡിഗ്രി വാട്ടർ ബാത്തിൽ വയ്ക്കുകയോ അല്ലെങ്കിൽ പാരാഫിലിം ഉപയോഗിച്ച് ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് 4 ഡിഗ്രിയിൽ അടച്ച് അടുത്ത ദിവസം വീണ്ടെടുക്കാൻ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്യുകയോ ചെയ്യാം.

10.സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്ത എലുവേറ്റ് അഡ്‌സോർപ്ഷൻ കോളത്തിലേക്കും വീണ്ടും സെൻട്രിഫ്യൂജിലേക്കും ചേർക്കുക.

PCR ഉൽപ്പന്നം വീണ്ടെടുക്കുന്നതിനുള്ള വിശദമായ രീതികളും നടപടിക്രമങ്ങളും

1. സാധാരണ റബ്ബർ റീസൈക്ലിംഗ്

നിങ്ങൾക്ക് പശ വീണ്ടെടുക്കണമെങ്കിൽ, ഒരു കിറ്റ് ഉപയോഗിക്കുന്നതാണ് നല്ലത്, അത് സൗകര്യപ്രദവും അൽപ്പം ഉയർന്ന വീണ്ടെടുക്കൽ നിരക്കും ഉണ്ട്.നിങ്ങൾക്ക് ഇത് സ്വമേധയാ വീണ്ടെടുക്കണമെങ്കിൽ, പശ മുറിച്ചതിന് ശേഷം നിങ്ങൾക്ക് TE യുടെ 3 മടങ്ങ് വോളിയം ചേർക്കാൻ കഴിയും.ഒരു വാട്ടർ ബാത്തിൽ ഉരുകിയ ശേഷം, ഫിനോൾ, ഫിനോൾ / ക്ലോറോഫോം എന്നിവ വൃത്തിയായി വേർതിരിച്ചെടുക്കുകയും എത്തനോൾ അടിഞ്ഞുകൂടുകയും ചെയ്യുന്നു.അത്രയേയുള്ളൂ.

2. കുറഞ്ഞ ദ്രവണാങ്കം ജെല്ലുകളിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎ വീണ്ടെടുക്കൽ

ഡിഎൻഎ ശകലങ്ങളുടെ ശുദ്ധീകരണം ജെല്ലിന്റെ അളവിന് തുല്യമായ TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ചേർത്ത് 5 മിനിറ്റ് നേരം 65 ° C വാട്ടർ ബാത്തിൽ വയ്ക്കുക.

ഊഷ്മാവിൽ എത്തിച്ച ശേഷം, തുല്യ അളവിലുള്ള ഫിനോൾ (മുകളിലെ പാളിയിൽ TE, TE ഉപയോഗിച്ച് പൂരിതമാക്കി, ഫിനോളിന്റെ താഴത്തെ പാളി നീക്കം ചെയ്തു) ചേർത്ത്, മിശ്രിതം സൌമ്യമായി കലർത്തി (മിക്സിംഗ് ആവശ്യമില്ല), 12,000 rpm-ൽ 3 മിനിറ്റ് സെൻട്രിഫ്യൂജ് ചെയ്തു.1-2 തവണ ആവർത്തിക്കുക.

സൂപ്പർനാറ്റന്റ് എടുക്കുക, 0.1 വോളിയം 3mol/L സോഡിയം അസറ്റേറ്റും (pH 5.2) 2.5 മടങ്ങ് വോളിയം സമ്പൂർണ്ണ എഥനോളും എഥനോൾ മഴ പെയ്തെടുക്കാൻ ചേർക്കുക.ഉചിതമായ അളവിൽ TE യുടെ ശുദ്ധീകരിച്ച ഡിഎൻഎ പിരിച്ചുവിടുക, ഉള്ളടക്കം അളക്കുക, ഉപയോഗത്തിനായി തയ്യാറാക്കുക (ഇത് ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ഘടന വിശകലനം, അന്വേഷണം തയ്യാറാക്കൽ മുതലായവയ്ക്ക് ഉപയോഗിക്കാം).

3. നല്ല ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രത്യേകതയുള്ള PCR വീണ്ടെടുക്കൽ

പിസിആർ ആംപ്ലിഫിക്കേഷന്റെ പ്രത്യേകത നല്ലതാണെങ്കിൽ, ഇത് പിസിആർ ഉൽപ്പന്നത്തിന്റെ ലളിതമായ ശുദ്ധീകരണവും വീണ്ടെടുക്കലും മാത്രമാണ്.നിങ്ങൾക്ക് PCR ഉൽപ്പന്നത്തിലേക്ക് 50ug/ml പ്രോട്ടീനേസ് കെ ചേർക്കാം, 1 മണിക്കൂറിന് 37 ഡിഗ്രി, ഫിനോൾ/ക്ലോറോഫോം ഉപയോഗിച്ച് ഒരിക്കൽ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌റ്റ് ചെയ്യുക, ക്ലോറോഫോം ഉപയോഗിച്ച് ഒരിക്കൽ എക്‌സ്‌ട്രാക്‌റ്റ് ചെയ്യുക, കൂടാതെ സൂപ്പർനാറ്റന്റിന്റെ 0.1 വോള്യം ചേർക്കുക.സോഡിയം അസറ്റേറ്റ് 2.5 വോളിയം കേവല എത്തനോൾ ഉപയോഗിച്ച് മഴയിൽ വീണ്ടെടുത്തു.

ബന്ധപ്പെട്ട ഉല്പന്നങ്ങൾ:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/