ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തുന്ന പല വിദ്യാർത്ഥികളും കേൾക്കാൻ ആഗ്രഹിക്കാത്ത ഒരു സെൻസിറ്റീവ് വാക്കാണ് RNase.പൂർണ്ണമായും സായുധരായ, ഒടുവിൽ ഉയർന്ന വിഷാംശമുള്ള ഫിനോൾ, ക്ലോറോഫോം എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് വേർതിരിച്ചെടുത്ത ആർ.എൻ.എ.ഞാൻ അനുരഞ്ജനത്തിലല്ല!!!ഇന്ന്, നമുക്ക് പ്രശസ്തമായ Rnase-ന്റെ ഉത്ഭവം നോക്കാം.

RIbonuclease (RNase), അല്ലെങ്കിൽ RNase, RNA-യെ ഹൈഡ്രോലൈസ് ചെയ്ത് ചെറിയ തന്മാത്രകളാക്കാൻ കഴിയുന്ന ഒരു ന്യൂക്ലീസാണ്.ഒരു ചെറിയ മോളിക്യൂൾ പ്രോട്ടീൻ എന്ന നിലയിൽ RNase അസാധാരണമാംവിധം സ്ഥിരതയുള്ളതാണ് .പരമ്പരാഗത ഉയർന്ന താപനിലയും ഉയർന്ന സമ്മർദ്ദവുമുള്ള നീരാവി വന്ധ്യംകരണത്തിനും പ്രോട്ടീൻ ഇൻഹിബിറ്ററുകൾക്കും ഇത് പൂർണ്ണമായും നിർജ്ജീവമാക്കാൻ കഴിയില്ല.RNase ന്റെ സ്ഥിരത പ്രധാനമായും വരുന്നത് ഘടനയിലെ ഡിസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകളിൽ നിന്നാണ്.ഉദാഹരണത്തിന്, ബോവിൻ പാൻക്രിയാസിന്റെ സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന RNase ന് 124 അമിനോ ആസിഡുകൾ മാത്രമേ ഉള്ളൂ, എന്നാൽ 4 ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.സൾഫർ ബോണ്ടും ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ടും RNase മികച്ച താപ സ്ഥിരത നൽകുന്നു.കൂടാതെ, rnase ന് താരതമ്യേന ചെറിയ തന്മാത്രാ ഭാരം ഉണ്ട്, മാത്രമല്ല പല സന്ദർഭങ്ങളിലും അതിന്റെ യഥാർത്ഥ ഘടന വേഗത്തിൽ പുനഃസ്ഥാപിക്കാൻ കഴിയും.

വളരെ സ്ഥിരതയുള്ളതിനു പുറമേ,RNases ലബോറട്ടറിയിൽ സർവ്വവ്യാപിയാണ് .RNase ഒരു ജൈവ പ്രതിരോധ സംവിധാനമാണ്.ഒരു കോശത്തിന്, എക്സോജനസ് ആർഎൻഎ പലപ്പോഴും മാരകമാണ്.എക്സോജനസ് ഡിഎൻഎയുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, എക്സോജനസ് ആർഎൻഎ പലപ്പോഴും അപകടകരമാണ്.ആർ‌എൻ‌എ സന്തോഷത്തോടെ ട്രാൻസ്‌ക്രൈബ് ചെയ്യുകയും വിവർത്തനം ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു, അതിനാൽ മിക്കവാറും എല്ലാ ജീവികളും ബാഹ്യ ആർ‌എൻ‌എയുടെ അധിനിവേശത്തിനെതിരെ പ്രതിരോധിക്കാൻ ആർ‌എൻ‌എസുകൾ രൂപപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്.അതിനാൽ, ലബോറട്ടറിയിൽ കൃഷിചെയ്യുന്ന ബാക്ടീരിയൽ കോശങ്ങളും ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്ന നിങ്ങളും RNase ന്റെ സുഗന്ധം പുറന്തള്ളുന്നു.മനുഷ്യ ശരീര സ്രവങ്ങളിൽ (ഉമിനീർ, കണ്ണുനീർ മുതലായവ) വലിയ അളവിൽ RNase അടങ്ങിയിട്ടുണ്ട്, അതിനാൽ RNA നശിക്കപ്പെടുമ്പോൾ കരയരുത്.നിങ്ങൾ എത്രയധികം കരയുന്നുവോ അത്രയും മോശമാണ് ആർഎൻഎയുടെ അപചയം!!സഹോദരി ദയ്യൂ ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ അനുയോജ്യമല്ല!

കൂടാതെ, നിങ്ങളുടെ അതിലോലമായ ചർമ്മത്തിൽ ധാരാളം RNase അടങ്ങിയിട്ടുണ്ട്, കൂടാതെ ചർമ്മത്തിൽ സ്പർശിച്ച മാർക്കറുകൾ, പൈപ്പറ്റുകൾ, റഫ്രിജറേറ്റർ ഡോറുകൾ, ഡോർ ഹാൻഡിലുകൾ എന്നിവയിലും RNase അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.

ഇത്രയധികം അലയടിക്കുമ്പോൾ, RNases എങ്ങനെ കൈകാര്യം ചെയ്യണമെന്ന് നമുക്ക് നോക്കാം.

ആർഎൻഎ നീക്കം ചെയ്യുമ്പോൾ എല്ലാവരും ആദ്യം ചിന്തിക്കുന്നത്DEPC(ഡൈതൈൽ പൈറോകാർബണേറ്റ്).DEPC പ്രധാനമായും RNase ആക്ടീവ് ഗ്രൂപ്പായ ഹിസ്റ്റിഡിനിന്റെ ഇമിഡാസോൾ വളയവുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് പ്രോട്ടീനിനെ ഇല്ലാതാക്കുന്നു, അതുവഴി എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു.0.1% DEPC ന് Rnase-ൽ മികച്ച നീക്കംചെയ്യൽ പ്രഭാവം ഉണ്ടാകും, എന്നാൽ DEPC അറിയപ്പെടുന്ന ഒരു അർബുദമാണെന്ന കാര്യം ശ്രദ്ധിക്കേണ്ടതുണ്ട്, അതിനാൽ ഇത് ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ പ്രത്യേക ശ്രദ്ധ നൽകണം.

RNase-ന്, നമ്മൾ രണ്ട് വശങ്ങളിൽ നിന്ന് ആരംഭിക്കേണ്ടതുണ്ട്,ആദ്യത്തേത് എൻഡോജെനസ് RNase ന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ തടയുക എന്നതാണ്

ട്രൈസോളിൽ അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ്, ഡിടിടി തുടങ്ങിയ പരമ്പരാഗത ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ റിയാഗന്റുകൾക്ക് RNase-ന്റെ ഡൈസൾഫൈഡ് ബോണ്ട് തുറക്കാൻ കഴിയും, പക്ഷേ ഇപ്പോഴും ചില RNases ഉണ്ട്, പ്രത്യേകിച്ച് ടിഷ്യു സാമ്പിളുകളിൽ, അതിനാൽ കുറഞ്ഞ താപനില ശ്രദ്ധിക്കുക.

1.ടിഷ്യൂ സാമ്പിൾ പുറത്തെടുത്ത ശേഷം ദ്രാവക നൈട്രജനിലോ വാണിജ്യ ആർഎൻഎ സംരക്ഷണ ലായനിയിലോ മുക്കിവയ്ക്കുക.

2.സെൽ സാമ്പിളിന്റെ ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുത്ത ശേഷം, ലിസിസ് ലായനിയിൽ ചേർത്ത് ഐസ് ബോക്സിൽ വയ്ക്കുക.

3. പൊടിക്കുന്നതിന് ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ ഉപയോഗിക്കുന്നതാണ് നല്ലത് ടിഷ്യു സാമ്പിളുകൾ ഏകതാനമാക്കുമ്പോൾ.ലിക്വിഡ് നൈട്രജൻ ഇല്ലാതെ ഒരു ഇലക്ട്രിക് ഹോമോജെനൈസർ ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, ഹോമോജെനേറ്റ് അഡാപ്റ്റർ പൂർണ്ണമായും പ്രീ-തണുപ്പിക്കുന്നതിന് ശ്രദ്ധിക്കുക.

രണ്ടാമത്തേത് exogenous DNase ആണ്

1.പൂർണ്ണമായും സായുധരായിരിക്കുക, ലാബ് കോട്ട് ധരിക്കുക, മാസ്‌ക് ധരിക്കുക, കൂടാതെ ഒരു ജോടി പുതിയ കയ്യുറകൾ ധരിക്കുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക (അത്രയും മിതവ്യയം ചെയ്യരുത്!! ട്രൈസോൾ അതിശക്തമാണ്, കൂടാതെ ഇത് കയ്യുറകളിലൂടെ വളരെ ശക്തമാണ്, അതിനാൽ നിങ്ങളുടെ കൈകളിൽ തുള്ളിമരുന്ന് വീഴരുത്).

2.ഉപയോഗിച്ച എല്ലാ പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകൾ, ഇപി ട്യൂബുകൾ, പിസിആർ ട്യൂബുകൾ, മറ്റ് ഉപകരണങ്ങൾ എന്നിവ ഡി-ആർ‌നേസ് ചികിത്സിച്ചിരിക്കണം.ഇത് 0.1% ഡിഇപിസിയിൽ മുക്കിവയ്ക്കുകയും പിന്നീട് ഉയർന്ന മർദ്ദത്തിൽ അമർത്തുകയും ചെയ്യാം.ഒരു ഫ്യൂം ഹുഡിലെ പ്രവർത്തനം ശ്രദ്ധിക്കുക.പ്രാദേശിക സ്വേച്ഛാധിപതികൾക്ക് എൻസൈമുകൾ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനുള്ള ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾ നേരിട്ട് വാങ്ങാം.

PS: ഞാൻ നിങ്ങൾക്ക് ഒരു അലസമായ രീതി പറയാം.ഉയർന്ന താപനിലയും ഉയർന്ന മർദ്ദവും RNase പൂർണ്ണമായും നീക്കം ചെയ്യാൻ കഴിയില്ലെങ്കിലും, അത് അതിന്റെ വലിയൊരു ഭാഗം നീക്കം ചെയ്യും.2 തവണ ഉയർന്ന താപനിലയും ഉയർന്ന മർദ്ദവും നല്ല ഫലം നൽകുന്നു, കൂടാതെ ആർഎൻഎയുടെ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ ചെറിയ ഫലമുണ്ടാക്കുന്നു.

3.മദ്യത്തിന് പ്രോട്ടീനുകളെ ഇല്ലാതാക്കാൻ കഴിയും,അതിനാൽ ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ ടേബിൾ 75% ആൽക്കഹോൾ ഉപയോഗിച്ച് തുടയ്ക്കാം , കയ്യുറകൾ എന്നിവയും മദ്യം ഉപയോഗിച്ച് തളിക്കാവുന്നതാണ്.

4.അവസാന ആർഎൻഎ പിരിച്ചുവിടുന്ന ലായനി, സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബ് എന്നിവയും ഡി-ആർനേസ് ചികിത്സിക്കണം.ഡിഇപിസി ജലം സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ആർഎൻഎ പിരിച്ചുവിടുന്ന ലായനിയാണ്.ഡിഇപിസി ജലത്തിന്റെ ശരിയായ തയ്യാറാക്കൽ രീതിയെക്കുറിച്ച് നമുക്ക് സംസാരിക്കാം (വാങ്ങുമ്പോൾ വാണിജ്യ ഡിഇപിസി വീണ്ടും പാക്ക് ചെയ്യാൻ ഓർക്കുക)

1:1000-ന് അൾട്രാപ്പർ വെള്ളത്തിൽ DEPC ചേർക്കുക, നന്നായി കുലുക്കുക, 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് നിൽക്കട്ടെ, ഉയർന്ന ഊഷ്മാവിലും ഉയർന്ന മർദ്ദത്തിലും 15 മിനിറ്റ് നേരം 121 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ അണുവിമുക്തമാക്കുക.DEPC വെള്ളം -20°C-ൽ 1ml അലിക്കോട്ടുകളിൽ സംഭരിക്കാം.

അവസാനമായി, ചുരുക്കത്തിൽ: കുറഞ്ഞ താപനിലയാണ് പ്രധാനം, ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾ നന്നായി കൈകാര്യം ചെയ്യപ്പെടുന്നു, പൂർണ്ണമായും സായുധരും സംസാരം കുറവുമാണ്!

ശരി, അതാണ് ഇന്നത്തെ തന്ത്രം.താങ്കൾ പറഞ്ഞ എല്ലാ ആർഎൻഎ ഏകാഗ്രതയും പരിശുദ്ധിയും ഞാൻ ആശംസിക്കുന്നു.A260/A280 രണ്ടും 2.0 ആണ്!!!

തീർച്ചയായും, നിങ്ങൾ എ ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽറൂം ടെമ്പറേച്ചർ ഓപ്പറേഷൻ ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ കിറ്റ്, മുകളിൽ പറഞ്ഞ പ്രശ്‌നങ്ങൾ നിങ്ങൾക്ക് നേരിടേണ്ടി വരില്ല.

റൂം ടെമ്പറേച്ചറിലുള്ള പ്രവർത്തനം, DNase ചേർക്കാതെ, 11 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ കോശങ്ങളിൽ നിന്ന് മൊത്തം RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നു, കൂടാതെ 30 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ മൃഗകലകളിൽ നിന്നോ സസ്യങ്ങളിൽ നിന്നോ മൊത്തം RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കുന്നു.

ട്രയൽ സാമ്പിളുകൾക്കായി, ദയവായി ബന്ധപ്പെടുക:overseas@foregene.com

ബന്ധപ്പെട്ട ഉല്പന്നങ്ങൾ:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/