നയിക്കുക

ദൈർഘ്യമേറിയ നോൺ-കോഡിംഗ് RNA, lncRNA എന്നത് 200 ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളിൽ കൂടുതലുള്ള, സാധാരണയായി 200-100000 nt വരെ നീളമുള്ള ഒരു നോൺ-കോഡിംഗ് RNA ആണ്.lncRNA, എപ്പിജെനെറ്റിക്, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ, പോസ്റ്റ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ തലങ്ങളിൽ ജീൻ എക്സ്പ്രഷൻ നിയന്ത്രിക്കുന്നു, കൂടാതെ എക്സ് ക്രോമസോം സൈലൻസിങ്, ജീനോം ഇംപ്രിന്റിംഗ്, ക്രോമാറ്റിൻ പരിഷ്ക്കരണം, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ആക്റ്റിവേഷൻ, ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഇടപെടൽ, ന്യൂക്ലിയർ ട്രാൻസ്പോർട്ട്, സെൽ സൈക്കിൾ റെഗുലേഷൻ, സെൽ ഡിഫറൻഷ്യേഷൻ റെഗുലേഷൻ എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മറ്റ് പ്രധാന നഷ്ടപരിഹാര നിയന്ത്രണങ്ങൾ. മാനുഷിക രോഗങ്ങളുടെ വികസനവും പ്രതിരോധവും, നിലവിൽ ബയോമെഡിസിൻ മേഖലയിലെ ഹോട്ട് സ്പോട്ടുകളിൽ ഒന്നാണ്.

01  LncRNA യുടെ തരങ്ങളും സവിശേഷതകളും

മുകളിലെ ചിത്രത്തിൽ കാണിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ, രൂപീകരണത്തിന്റെ വിവിധ സ്രോതസ്സുകൾ അനുസരിച്ച് lncRNA പല തരങ്ങളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.ഇനിപ്പറയുന്ന സ്വഭാവസവിശേഷതകൾ ഉണ്ട്:

1. lncRNA-കൾ സാധാരണയായി ദൈർഘ്യമേറിയതാണ്, ഡൈനാമിക് എക്സ്പ്രഷനും വ്യത്യസ്‌ത വേർതിരിക്കൽ രീതികളും
2. കോഡിംഗ് ജീനുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, lncRNA യ്ക്ക് സാധാരണയായി ഒരു എക്സ്പ്രഷൻ ലെവൽ കുറവാണ്
3. മിക്ക lncRNA-കൾക്കും ടിഷ്യു വ്യതിരിക്തതയുടെയും വികാസത്തിന്റെയും പ്രക്രിയയിൽ സ്പഷ്ടമായ താൽക്കാലികവും സ്പേഷ്യൽ എക്സ്പ്രഷൻ പ്രത്യേകതയും ഉണ്ട്.
4. ട്യൂമറുകളിലും മറ്റ് രോഗങ്ങളിലും സ്വഭാവസവിശേഷതകൾ ഉണ്ട്
5. lncRNA യുടെ ഉപസെല്ലുലാർ സ്ഥാനങ്ങൾ വൈവിധ്യപൂർണ്ണമാണ്
6. സീക്വൻസ് കൺസർവേഷനിൽ കുറവാണ്, എന്നാൽ ഫംഗ്ഷനിൽ ഒരു നിശ്ചിത അളവിലുള്ള സംരക്ഷണമുണ്ട്.

02 LncRNA റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനെ കുറിച്ച് പതിവായി ചോദിക്കുന്ന ചോദ്യങ്ങൾ

കോശങ്ങളിലെ lncRNA യുടെ കുറഞ്ഞ ഉള്ളടക്കം, നീളം, ഉയർന്ന തലത്തിലുള്ള ഘടന എന്നിവ കാരണം, അത്തരം RNA യ്ക്ക് പലപ്പോഴും സ്റ്റെം ലൂപ്പുകൾ അല്ലെങ്കിൽ ഹെയർപിനുകൾ പോലുള്ള സങ്കീർണ്ണമായ ഘടനകളുണ്ട്, കൂടാതെ RT-qPCR പരാജയപ്പെടാത്ത റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ അല്ലെങ്കിൽ കുറഞ്ഞ കാര്യക്ഷമത പ്രശ്നങ്ങൾക്ക് സാധ്യതയുണ്ട്.

03 LncRNA റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സൊല്യൂഷൻ

സെൻട്രൽ റൂളിൽ, ആർഎൻഎ വൈറസുകൾ സ്വന്തം റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎയെ ഒരു ടെംപ്ലേറ്റായി ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎ സമന്വയിപ്പിക്കുന്ന പ്രക്രിയയെ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ എന്ന് വിളിക്കുന്നു.സിഡിഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റ് വിട്രോയിൽ സമന്വയിപ്പിക്കാൻ ആർഎൻഎ വൈറസ് റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ് ഉപയോഗിക്കുന്ന പ്രക്രിയയെ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ എന്ന് വിളിക്കുന്നു.റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിസ്റ്റത്തിൽ ഉൾപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്ന പ്രധാന ഘടകങ്ങൾ: RNA ടെംപ്ലേറ്റ്, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്, പ്രൈമറുകൾ, മറ്റ് ഘടകങ്ങൾ.

1.RNA ടെംപ്ലേറ്റ്

റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനിൽ ആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റിന്റെ സ്വാധീനം അതിന്റെ ഘടനയിലും വിശുദ്ധിയിലും സമഗ്രതയിലും പ്രതിഫലിക്കുന്നു.വേർതിരിച്ചെടുത്ത ആർ.എൻ.എ.യുടെ പരിശുദ്ധിയും സമഗ്രതയും കൂടുന്തോറും റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ കാര്യക്ഷമതയും തുടർന്നുള്ള ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ഫലങ്ങളും കൂടുതൽ കൃത്യവുമാണ്.സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ആർഎൻഎ എക്‌സ്‌ട്രാക്ഷൻ റിയാഗന്റുകളാൽ ശുദ്ധീകരിക്കപ്പെടുന്ന ആർഎൻഎയിൽ പലപ്പോഴും ആൽക്കഹോൾ, ഗ്വാനിഡിൻ ലവണങ്ങൾ എന്നിവയുടെ അവശിഷ്ടങ്ങൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, അവ മിക്ക റിവേഴ്‌സ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്റ്റേസിലും ശക്തമായ തടസ്സം സൃഷ്ടിക്കുന്നു.

2. റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസ്

മുഴുവൻ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിസ്റ്റത്തിലും റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസിന് ഒരു പ്രധാന സ്വാധീനമുണ്ട്.മിക്ക ലബോറട്ടറികളിലും ഉപയോഗിക്കുന്ന റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസിന് അനുയോജ്യമായ താപനില സാധാരണയായി 42 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസാണ്.വാസ്തവത്തിൽ, ഉയർന്ന തലത്തിലുള്ള RNA ഘടന തുറക്കുന്നതിന് ഉയർന്ന താപനില ആവശ്യമാണ്, കൂടാതെ റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്റ്റേസിന്റെ ആവശ്യകതകൾ കൂടുതലാണ്.

3.പ്രൈമർ

റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രൈമറുകളിൽ ജീൻ-നിർദ്ദിഷ്ട പ്രൈമറുകൾ, റാൻഡം പ്രൈമറുകൾ, ഒലിഗോ ഡിടി പ്രൈമറുകൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു.മിക്ക എൽഎൻസിആർഎൻഎകളിലും പോളിഎ ടെയിലുകൾ അടങ്ങിയിട്ടില്ല, ഒലിഗോ ഡിടിയുമായി റാൻഡം പ്രൈമറുകൾ ശരിയായി പൊരുത്തപ്പെടുത്തേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്.

4.മറ്റ് ഘടകങ്ങൾ

ആർഎൻഎ ഡീഗ്രേഡ് ചെയ്യാൻ വളരെ എളുപ്പമാണ് എന്ന വസ്തുത കണക്കിലെടുത്ത്, റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിസ്റ്റത്തിലെ ഘടകങ്ങളുടെ ആമുഖം കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും, ഇത് RNase-ന്റെ പ്രവേശനം ഫലപ്രദമായി തടയുകയും റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ സുഗമമായ പുരോഗതി ഉറപ്പാക്കുകയും ചെയ്യും.

Fഒറിജിൻആർഎൻഎ ടെംപ്ലേറ്റിൽ നിന്ന് ലഭിക്കുന്നു, qPCR-ലേക്കുള്ള റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ

നിങ്ങളുടെ lncRNA കണ്ടെത്തലിന് സമഗ്രമായി അകമ്പടി സേവിക്കുക

അനിമൽ ടോട്ടൽ RNA Iസോലേഷൻകിറ്റ് (gDNA നീക്കം ചെയ്യൽ കോളത്തിനൊപ്പം)

സെല്ലിന്റെ ആകെ RNA Iസോലേഷൻകിറ്റ് (gDNA നീക്കം ചെയ്യൽ കോളത്തിനൊപ്പം)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase-നൊപ്പം)(lncRNA-യിൽ നിന്നുള്ള ആദ്യ-സ്ട്രാൻഡ് cDNA സിന്തസിസിനായുള്ള സൂപ്പർ പ്രീമിക്സ്)

റിയൽ ടൈം PCR ഈസി TM-SYBR ഗ്രീൻ ഐ

Aഗുണങ്ങൾ ofആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ:

കിറ്റ് മൂന്നാം തലമുറ ആർഎൻഎ എക്സ്ട്രാക്ഷൻ സാങ്കേതികവിദ്യ ഉപയോഗിക്കുന്നു, DNase ഉപയോഗിക്കേണ്ടതില്ല.

96, 24, 12, 6 കിണർ പ്ലേറ്റ് കൾച്ചർഡ് സെല്ലുകളിൽ നിന്ന് 11 മിനിറ്റ്, gDNA രഹിത, ഉയർന്ന ശുദ്ധി, ഉയർന്ന ഗുണമേന്മയുള്ള ടോട്ടൽ സെൽ RNA യുടെ ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമത വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ.

lncRNA റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ പ്രയോജനങ്ങൾ:

ജീനോമിക് ഡിഎൻഎ മലിനീകരണം വേഗത്തിൽ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി എൽഎൻസിആർഎൻഎയ്ക്ക് വേണ്ടി പ്രത്യേകം വികസിപ്പിച്ചെടുത്ത ഒരു റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിസ്റ്റം.

റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ സിസ്റ്റത്തിന് ഉയർന്ന താപ സ്ഥിരതയുണ്ട്, ഇപ്പോഴും 50 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ മികച്ച റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ പ്രകടനമുണ്ട്.

ഉയർന്ന ജിസി ഉള്ളടക്കവും സങ്കീർണ്ണമായ ദ്വിതീയ ഘടനയും ഉള്ള ടെംപ്ലേറ്റുകൾ ഉയർന്ന കാര്യക്ഷമതയോടെ വിപരീതമാക്കാനാകും.

പ്രയോജനങ്ങൾof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase ന് ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കാര്യക്ഷമതയും ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റിയും ഉയർന്ന ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രത്യേകതയും ഉണ്ട്

ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത റിയൽ PCR ഈസി മിക്‌സ് SYBR ഗ്രീൻ ഐയെ ഉയർന്ന ഡിറ്റക്ഷൻ സെൻസിറ്റിവിറ്റി ഉള്ളതാക്കുന്നു, കൂടാതെ അതിന്റെ ഫ്ലൂറസെൻസ് തീവ്രത സമാന ഉൽപ്പന്നങ്ങളേക്കാൾ 3-5 മടങ്ങ് കൂടുതലാണ്, ഇത് വ്യത്യസ്ത തരം ഫ്ലൂറസെൻസ് ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് പരീക്ഷണങ്ങളുടെ ആവശ്യങ്ങൾ നിറവേറ്റുന്നു.