ആമുഖം:

RNA, ശാസ്ത്രീയ നാമം ribonucleic acid, അതിന്റെ ചുരുക്കെഴുത്ത് RiboNucleic Acid ൽ നിന്നാണ് വന്നത്, ഫോസ്ഫോഡിസ്റ്റർ ബോണ്ടുകൾ വഴി കുറഞ്ഞത് ഡസൻ കണക്കിന് റൈബോ ന്യൂക്ലിയോടൈഡുകളെ ബന്ധിപ്പിച്ച് രൂപംകൊണ്ട ഒരു തരം ന്യൂക്ലിക് ആസിഡാണ്.

ആർ‌എൻ‌എ പര്യവേക്ഷണം നടത്തുന്നതിന്റെ അടിസ്ഥാനം മലിനീകരണ രഹിത ടോട്ടൽ ആർ‌എൻ‌എ എക്‌സ്‌ട്രാക്റ്റുചെയ്യലാണ്, കൂടാതെ ആർ‌എൻ‌എ വേർതിരിച്ചെടുക്കലിന്റെ അടിസ്ഥാന തത്വം ഇനിപ്പറയുന്ന രീതിയിൽ സംഗ്രഹിക്കാം:

1. ആദ്യം കോശങ്ങളെ തടസ്സപ്പെടുത്തുക

2. തുടർന്ന് മാക്രോമോളികുലാർ മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യുക (പ്രോട്ടീനുകൾ, ലിപിഡുകൾ, ഡിഎൻഎ മുതലായവ)

3. അവസാനമായി, ലവണങ്ങളും ഓർഗാനിക് ലായകങ്ങളും നീക്കം ചെയ്യുമ്പോഴും ആർഎൻഎയെ കൂടുതൽ ശുദ്ധീകരിക്കുമ്പോഴും ആർഎൻഎ അടിക്കപ്പെടുന്നു.

വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ രീതിയുടെ ഭൂതകാലവും വർത്തമാനവും

പിയോറ്റർ ചോംസിൻസ്‌കി എന്ന മുത്തച്ഛനും മുത്തശ്ശി നിക്കോലെറ്റ സാച്ചിയും ചേർന്ന് കണ്ടുപിടിച്ച ട്രൈസോൾ മഴ പെയ്യിക്കൽ രീതിയാണ് (ഗ്വാനിഡിൻ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ്, ഫിനോൾ, ക്ലോറോഫോം മുതലായവ) ആദ്യ തലമുറയിലെ ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ രീതി.

പിന്നീട്, മുത്തച്ഛൻ ഈ പേറ്റന്റ് ഇൻവിട്രോജൻ എന്ന കമ്പനിക്ക് വിറ്റു, ഇൻവിട്രോജൻ ഈ രീതിയെ ലോകമെമ്പാടും പ്രചരിപ്പിക്കുകയും വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കപ്പെടുന്ന ഒരു രീതിയായി മാറുകയും ചെയ്തു.

പിന്നീട്, ഇൻവിട്രോജൻ തെർമോ സ്വന്തമാക്കി!

പ്രതിനിധി ഉൽപ്പന്നം: ഇൻവിട്രോജന്റെ ട്രിസോൾ റീജന്റ്

എന്നിരുന്നാലും, TRIzol മഴയുടെ രീതിക്ക് ഒന്നിലധികം മഴയും RNA വേർതിരിച്ചെടുക്കലും ആവശ്യമാണ്, കൂടാതെ ഉപയോഗിക്കുന്ന റിയാക്ടറുകൾ വിഷാംശമുള്ളതും പ്രവർത്തിക്കാൻ വളരെ സമയമെടുക്കുന്നതുമാണ്.

അതിനാൽ, രണ്ടാം തലമുറ കോളം-എൻസൈം ശുദ്ധീകരണ രീതി നിലവിൽ വന്നു, മറ്റ് മാലിന്യങ്ങൾ നീക്കം ചെയ്യുമ്പോൾ സാമ്പിളിലെ ആർ‌എൻ‌എയുടെ വീണ്ടെടുക്കൽ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ഒരു പ്രത്യേക ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് അഡോർപ്ഷൻ മെറ്റീരിയലായി സിലിക്ക ജെൽ മെംബ്രൺ ഉപയോഗിക്കുന്നു.

രണ്ടാം തലമുറ രീതി സ്ഥിരമായ പ്രകടനത്തിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ പ്രവർത്തനം ലളിതമാക്കുന്നു, അപകടസാധ്യത കുറയ്ക്കുന്നു, ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കലിന്റെ കാര്യക്ഷമത മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.

പ്രതിനിധി ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ: QIAGEN RNeasy കൂടാതെ മിക്ക ആഭ്യന്തര ഉൽപ്പന്നങ്ങളും

എന്നിരുന്നാലും, ഒന്നും രണ്ടും തലമുറ രീതികൾക്ക് ഡിഎൻഎ മലിനീകരണം നീക്കം ചെയ്യാൻ DNase ഉപയോഗിക്കേണ്ടതുണ്ട്, ഇത് തുടർന്നുള്ള ഡൗൺസ്ട്രീം പരീക്ഷണങ്ങൾക്ക് ചില അസൗകര്യങ്ങൾ നൽകുന്നു.ശേഷിക്കുന്ന DNase റിവേഴ്സ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷന്റെ കാര്യക്ഷമത കുറയ്ക്കുകയും ആദ്യ-സ്ട്രാൻഡ് cDNA സിന്തസിസ് കുറയ്ക്കുകയും അതുവഴി ഫലങ്ങളുടെ കൃത്യതയെ ബാധിക്കുകയും ചെയ്യും.

അതിനാൽ, രണ്ടാം തലമുറയുടെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ മൂന്നാം തലമുറ വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ രീതി ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തിരിക്കുന്നു.പരീക്ഷണത്തിന് എൻസൈമുകളൊന്നും ചേർക്കേണ്ടതില്ല, രണ്ട് നിരകൾ ഉപയോഗിച്ച് ആർഎൻഎ എളുപ്പത്തിൽ ലഭിക്കും.

കോളം 1: ഡിഎൻഎ ക്ലിയർ ചെയ്യാനുള്ള ഡിഎൻഎ ക്ലീനിംഗ് കോളം

കോളം 2: ആർഎൻഎ-മാത്രം കോളം പ്രത്യേകമായി ആർഎൻഎയെ ആഗിരണം ചെയ്യുകയും വീണ്ടെടുക്കുകയും ചെയ്യുന്നു

അത്തരമൊരു ലളിതമായ പ്രവർത്തനം സമയം ലാഭിക്കുക മാത്രമല്ല, താഴ്ന്ന പരീക്ഷണങ്ങളുടെ പ്രവർത്തനം സുഗമമാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു!

പ്രതിനിധി ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ: QIAGEN RNeasy Plus കൂടാതെഫോറിൻആർഎൻഎ ശുദ്ധീകരണ പരമ്പര ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ

(RNeasy പ്ലസ്)

(ഫോറെജീന്റെപ്ലാന്റ് ടോട്ടൽ ആർഎൻഎ ഐസൊലേഷൻ കിറ്റ്)

നിശബ്ദമായി നിങ്ങളോട് പറയുക!Foregene ന്റെ RNA കിറ്റ്, ഉപയോഗിക്കാൻ എളുപ്പമുള്ള ഒരു സൂപ്പർ RNase Eraser അവതരിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് മനുഷ്യശരീരത്തിൽ വിഷ പദാർത്ഥങ്ങളൊന്നും ചേർക്കാതെ 1 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ 400μg RNase പൂർണ്ണമായും നീക്കം ചെയ്യാൻ കഴിയും!

ചിത്രം1: പ്രവർത്തന പ്രക്രിയ താരതമ്യ ചാർട്ട്

ഫോർജീന്റെ ഉൽപ്പന്നങ്ങൾക്ക് രണ്ട് പാട്ടുകൾ കൊണ്ട് ആർഎൻഎ വേർതിരിച്ചെടുക്കാൻ കഴിയും, നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണ പുരോഗതിയിൽ മറ്റുള്ളവരെ അസൂയപ്പെടുത്തരുത്!

ചിത്രം2:Eപരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾ താരതമ്യ ചാർട്ട്

ആദ്യ തലമുറ (1: TRIzol)

രണ്ടാം തലമുറ (2: QIAGEN-ന്റെ RNeasy)

മൂന്നാം തലമുറ (3: QIAGEN ന്റെ RNeasy പ്ലസ്, 4: Foregene)

ചിത്രം3: qPCR ഗ്രാഫ് (ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ കർവ് ഗ്രാഫ്)

ആദ്യ തലമുറ (പച്ച എന്നാൽ TRIzol -, ചുവപ്പ് എന്നാൽ TRIzol +)

രണ്ടാം തലമുറ (ആകാശ നീല എന്നാൽ QIAGEN RNeasy-, ചുവപ്പ് എന്നാൽ QIAGEN RNeasy +)

മൂന്നാം തലമുറ (നീല എന്നാൽ QIAGEN RNeasy പ്ലസ്, പച്ച എന്നാൽ Foregene)

(കുറിപ്പ്: qPCR ഗ്രാഫ് "-" സൂചിപ്പിക്കുന്നത് DNase ചേർത്തിട്ടില്ലെന്നും DNA മലിനീകരണം നീക്കം ചെയ്തിട്ടില്ലെന്നും ആണ്. അതിനാൽ, CT കൂടുതലാണ്, ഫലം കൃത്യമല്ല; "+" എന്നത് DNase ചേർത്തിട്ടുണ്ടെന്നും DNA മലിനീകരണം നീക്കം ചെയ്‌തിട്ടുണ്ടെന്നും സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഫലം കൃത്യമാണ്)

ഓരോ സാങ്കേതിക നവീകരണവും അർത്ഥമാക്കുന്നത് പരീക്ഷണത്തിന്റെ പ്രവർത്തനം ലളിതവും കൂടുതൽ ഉപയോക്തൃ-സൗഹൃദവുമായ ദിശയിൽ വികസിക്കുന്നു എന്നാണ്.

കൂടുതൽ ശാസ്ത്ര ഗവേഷകരെ പരീക്ഷണ സമയവും ചെലവും ലാഭിക്കാനും ഉയർന്ന നിലവാരമുള്ള പരീക്ഷണ ഫലങ്ങൾ നേടാനും കൂടുതൽ മൂല്യവത്തായ ശാസ്ത്ര ഗവേഷണ നേട്ടങ്ങൾ സംയുക്തമായി സൃഷ്ടിക്കാനും ഫോറെജീൻ ലക്ഷ്യമിടുന്നു.